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Molecular markers closely linked to fusarium resistance genes in chickpea show siginificant alignments to pathogenes-related genes located on arabidopsis.

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Apresentação em tema: "Molecular markers closely linked to fusarium resistance genes in chickpea show siginificant alignments to pathogenes-related genes located on arabidopsis."— Transcrição da apresentação:

1 Molecular markers closely linked to fusarium resistance genes in chickpea show siginificant alignments to pathogenes-related genes located on arabidopsis chromosomes 1 and 5 Theoretical Applied Genetics 2003 Benko-Iseppon, A.M.; Winter, P.; Huettel, B.; Staginnus, C.; Kahl, G.

2 Marcadores moleculares ligados a genes de resistência a fusarium em grão-de-bico mostram alinhamentos significativos a genes relacionado à patogênese localizados em cromossomos 1 e 5 de arabidopsis Luiz Nali Isaac Farias Ferreira Neto

3 Resumo Populações resistentes e suscetíveis (F7-F8) Seleção de primers (DAF +BSA) Produto amplificado Excisão Clonagem Seqüenciamento SCAR BLAST-X Busca de Homologia Alinhamento significativo (cromossomo 1 e 5 de Arabidopsis)

4 Introdução Importância econômica Importância econômica Distribuição geográfica do Grão-de-bico Distribuição geográfica do Grão-de-bico Fatores limitantes de produção Fatores limitantes de produção Situação atual do melhoramento e perspectivas Situação atual do melhoramento e perspectivas

5

6 Objetivo Mapeamento genético direcionado a regiões de resistência a fusarium em populações de grão-de-bico através de análise de bulks segregantes

7 Material e Métodos ICC-4978 (parental resistente) X Cicer reticulatum PI (parental suscetível) ICC-4978 (parental resistente) X Cicer reticulatum PI (parental suscetível) 131 plantas de populações F7-F8 (RILs) 131 plantas de populações F7-F8 (RILs) Extração e quantificação de DNA Extração e quantificação de DNA

8 Análise de bulks segregantes (BSA) Análise de bulks segregantes (BSA)

9 Amplificação de DNA 35 ºC 95 ºC DAFSCAR Volume da reação 15 µL50 µL Tampão 10x 1,5 µL5 µL MgCl 2 2,5 mM1,5 mM dNTP-mix10 mM200 mM Taq polimerase 0,4 U0,5 U Primers40 pmol250 pmol Temp. de anelamento 35 ºC62-65 ºC DNA15 ng12 ng

10 Análise de ligações

11 Isolamento e clonagem Qiaquick Kit Vetor pGEM -T E. Coli DH10-B, DH5- α ou SURE Eletroporação Seleção de plasmídeos

12 Seqüenciamento dos fragmentos

13 Análise das seqüências (BLAST-X e BLAST-N)

14 Resultados 1ª Etapa (12 indivíduos) 432 primers BSA + DAF B R B s 174 primers polimórficos 2ª Etapa 174 primers Parentais 7R I 7S I 24 primers 19 primers selecionados (Grupo de ligação 2 do Foc- 4 e foc-5)

15 Primers selecionados

16 BLAST-X de seqüências clonadas

17 Mapa de ligação (Mapmaker)

18 Primers SCAR derivados de marcadores DAF a partir do PRIMER 3

19 Conclusões Os marcadores produzidos aumentaram a densidade de marcas nos flancos do gene de resistência Foc-4; Os marcadores produzidos aumentaram a densidade de marcas nos flancos do gene de resistência Foc-4; O fragmento oriundo do primer OP-P15-3 obteve similaridade à proteína N-hidroxicinamol/benzotransferase (regulador de fitoalexina) encontrado no cromossomo 5 na A. thaliana; O fragmento oriundo do primer OP-P15-3 obteve similaridade à proteína N-hidroxicinamol/benzotransferase (regulador de fitoalexina) encontrado no cromossomo 5 na A. thaliana; Encontrou-se no fragmento do primer OP-P15-3 uma pequena seqüência com função similar a uma proteína de resistência (semelhante a um retrotransposon) presente em A. thaliana e Tabacum as quais são ricas em seqüências de leucina; Encontrou-se no fragmento do primer OP-P15-3 uma pequena seqüência com função similar a uma proteína de resistência (semelhante a um retrotransposon) presente em A. thaliana e Tabacum as quais são ricas em seqüências de leucina; O fragmento oriundo do primer OP-M20-3 possui similaridade ao gene de reparo MutS2 existente no cromossomo 5 da A. thaliana; O fragmento oriundo do primer OP-M20-3 possui similaridade ao gene de reparo MutS2 existente no cromossomo 5 da A. thaliana;

20 Alguns marcadores moleculares presentes no mesmo grupo de ligação do gene de resistência ao Fusarium, apresentaram alinhamentos significativos a genes relacionados a patogenicidade localizados nos cromossomos 1 e 5 da A. thaliana; Alguns marcadores moleculares presentes no mesmo grupo de ligação do gene de resistência ao Fusarium, apresentaram alinhamentos significativos a genes relacionados a patogenicidade localizados nos cromossomos 1 e 5 da A. thaliana; Por outro lado, não foi possível localizar nenhum marcador suficientemente próximo aos loci de resistência (Foc-4 e Foc-5) para permitir uma clonagem baseado no mapa. Por outro lado, não foi possível localizar nenhum marcador suficientemente próximo aos loci de resistência (Foc-4 e Foc-5) para permitir uma clonagem baseado no mapa.

21 Etapas futuras Está sendo gerado uma biblioteca de BAC para mapeamento físico com utilização de SCARs, onde irá permitir a clonagem dos genes de resistência.

22 Obrigado!!! Merci!!! Thanks!!! Grazie!!! Thanks!!! Grazie!!! !!! σας ευχαριστούμε!!! !!! σας ευχαριστούμε!!! dank u!!! !!! dank u!!! !!! Danke!!! Gracias!!! Brigado macho!!! Danke!!! Gracias!!! Brigado macho!!!


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