MCM é depositado de maneira bem regulada! ► Replicação = 1 vez só por ciclo (amplificação) ► 4 coisas:  Replicação (como o ciclo celular) é regulada pelas.

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1 MCM é depositado de maneira bem regulada! ► Replicação = 1 vez só por ciclo (amplificação) ► 4 coisas:  Replicação (como o ciclo celular) é regulada pelas cinases/ciclinas e ligases de ubiquitina  MCM helicase é depositada de forma bem controlada ► MCM = mini-chromosome maintenance (helicase) ► ► Cdt1/RLF-B = “carregador” da MCM   ORCs escolhem a origem e acendem como fósforo   Saída de Go envolve estabilização de cdc6 que tem a ver com o carregamento da helicase.

2 Coisa 1

3 Licensing = licenciar uma origem pra replicar Por que raios é só em G1??? Licenciar = por a placa ► ► 14 ORCs se ligam à cromatina após a fase S e antes de G1. ► ► Cdc6 liga nas 14 ORCs no próximo G1pm ► ► O “carregador” da MCM (cdt1) liga em cima disso ► ► MCM chega, completando a tchurma = preRC (pré roberto carlos) ► ► Na hora do vamo vê mais 22 proteínas ativam o preRC e a helicase abre as fitas e duas origens se formam!! MCM 0000 cdc6 cdt1

4 Como quem “acendeu” é inibido a formar preRC? cdk2/A + geminina + cdc7/dbf4

5 E depois de S... - fosfatase cdc25 deixa formar cdk1/B -cdk1/B executa mitose e tem que sumir (culpa de APC) -APC degrada a geminina liberando cdt1 em G1 -cdc6 na saída do ciclo é desfosforilado e procura ORCs... !

6 Licensing = ocorreria durante G1pm (ponto R) - ciclinas D, E e A decaem - inibidor genérico p27 inibe ciclina/cdk

7 Coisa 2

8 MCM é depositada de maneira bem controlada ► Em metazoa cdt1 está ligado ao licensing  superexpresse cdt1 que o DNA re-replica ► Cdt1 é controlado por ubiquitinilações ( M,G1 S, G2)  Cdt1-P (cdk2/A) é alvo de SCF  tchau  Cdt1 convidado por PCNA é alvo de CDL  tchau  Geminina (S/M) inibe cdt1 (metazoa): perda = re-rep No novo G1, geminina some e tem algum cdt1 para ajudar nos novos preRC

9 Coisa 3

10 ORCs escolhem a origem ► Em levedura ORCs ligam na sequência da origem (ARS)  Ficam lá o tempo todo! Desligadas por fosforilações (cdk1/B) ► Em metazoa = sequência + fatores epigenéticos  Modificações em subunidades  Perda de atividade de ORC durante a mitose ORC 2-5 = grude ORC 1 e 6 associadas ORC 1 é sequestrada por cdk1/A Daí SCF ubiquitinila!  citoplasma  degradação Em M, ORC 1 está hiperfosforilada Saída de M: A some  ORC 1 livre!

11 Coisa 4

12 Papel de cdc6 ► Em levedura cdc6 acumula em G1  S e em S é degradada ► Em mamíferos ela é importante na saída de Go  fosforilada por cdks, não liga APC e não é degradada. ► Ela fosforilada, segura a mitose, até que S se complete  Atuando sobre chk1 que inibe cdc25 logo cdk1/B não se forma