Biologia Molecular Básica e Aplicada

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Transcrição da apresentação:

Biologia Molecular Básica e Aplicada Primeira Oficina de Trabalho das Redes Nacionais de Laboratórios Dra. Maria Inês de Moura Campos Pardini Pesquisadora do Depto. de Clínica Médica da FMB Responsável pelo Lab. de Biologia Molecular do Hemocentro-Botucatu

SEQUENCIAMENTO H A* T* C* G*

SEQUENCIAMENTO T* GAC TGAAGCTGTTCTG* CTGACTTCGACAAGACTAAA TGAAGC* TGAAGCTGTTCTGATTT*

SEQUENCIAMENTO T* T* T* T* GAC TGAAGCTGTTATG* GAC TGAAGCTGTTCTGATTT*

SEQUENCIAMENTO Eletroforese DNA Fita Simples Complementaridade de 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ Fragmentos maiores Fragmentos menores 3’ 5’ Complementaridade de Cadeias

SEQUENCIAMENTO

A DETECÇÃO DE MUTAÇÕES NO GENÓTIPO VIRAL GENOTIPAGEM

AIDS

GENOMA DO HIV Genes Estruturais Genes Regulatórios

TRANSCRIPTASE REVERSA HETERODÍMERO P51 450 aa P66 560 aa

RNA cDNA cDNA DNA

PROTEASE Asp – Thr - Gly

CICLO REPLICATIVO

TRATAMENTO FASES PRECOCES INIBIDORES DA PROTEASE FASES TARDIAS TRANSCRIPTASE REVERSA FASES PRECOCES INIBIDORES DA PROTEASE FASES TARDIAS INIBIDORES DA PROTEASE

VÍRUS SELVAGEM (WILD TYPE) RESISTÊNCIA VÍRUS SELVAGEM (WILD TYPE) VÍRUS MUTANTE MUTAÇÕES SILENCIOSAS ALTERAÇÕES DE AA

FENOTIPAGEM GENOTIPAGEM RESISTÊNCIA FENOTIPAGEM GENOTIPAGEM

INT PR TR

Extração de RNA RT- PCR Extração de DNA PCR

Reação em cadeia da Polimerase PCR DNA genômico Taq polimerase Primers Tampão dCTP dATP dGTP dTTP 72ºC 57ºC 94ºC

NESTED PCR TR NESTED PCR PR PRODUTO DA PCR

REVELAÇÃO

SEQÜENCIAMENTO Descrita por Sanger et al em 1977 nucleotídeo análogo PCR Dideoxinucleotídeo

SEQUENCIAMENTO AUTOMÁTICO

Arte gráfica: Adriana, Rejane, minhas alunas.

www.hemocentro@fmb.unesp.br pardini@laser.com.br