Biologia Molecular Básica e Aplicada Primeira Oficina de Trabalho das Redes Nacionais de Laboratórios Dra. Maria Inês de Moura Campos Pardini Pesquisadora do Depto. de Clínica Médica da FMB Responsável pelo Lab. de Biologia Molecular do Hemocentro-Botucatu
SEQUENCIAMENTO H A* T* C* G*
SEQUENCIAMENTO T* GAC TGAAGCTGTTCTG* CTGACTTCGACAAGACTAAA TGAAGC* TGAAGCTGTTCTGATTT*
SEQUENCIAMENTO T* T* T* T* GAC TGAAGCTGTTATG* GAC TGAAGCTGTTCTGATTT*
SEQUENCIAMENTO Eletroforese DNA Fita Simples Complementaridade de 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ Fragmentos maiores Fragmentos menores 3’ 5’ Complementaridade de Cadeias
SEQUENCIAMENTO
A DETECÇÃO DE MUTAÇÕES NO GENÓTIPO VIRAL GENOTIPAGEM
AIDS
GENOMA DO HIV Genes Estruturais Genes Regulatórios
TRANSCRIPTASE REVERSA HETERODÍMERO P51 450 aa P66 560 aa
RNA cDNA cDNA DNA
PROTEASE Asp – Thr - Gly
CICLO REPLICATIVO
TRATAMENTO FASES PRECOCES INIBIDORES DA PROTEASE FASES TARDIAS TRANSCRIPTASE REVERSA FASES PRECOCES INIBIDORES DA PROTEASE FASES TARDIAS INIBIDORES DA PROTEASE
VÍRUS SELVAGEM (WILD TYPE) RESISTÊNCIA VÍRUS SELVAGEM (WILD TYPE) VÍRUS MUTANTE MUTAÇÕES SILENCIOSAS ALTERAÇÕES DE AA
FENOTIPAGEM GENOTIPAGEM RESISTÊNCIA FENOTIPAGEM GENOTIPAGEM
INT PR TR
Extração de RNA RT- PCR Extração de DNA PCR
Reação em cadeia da Polimerase PCR DNA genômico Taq polimerase Primers Tampão dCTP dATP dGTP dTTP 72ºC 57ºC 94ºC
NESTED PCR TR NESTED PCR PR PRODUTO DA PCR
REVELAÇÃO
SEQÜENCIAMENTO Descrita por Sanger et al em 1977 nucleotídeo análogo PCR Dideoxinucleotídeo
SEQUENCIAMENTO AUTOMÁTICO
Arte gráfica: Adriana, Rejane, minhas alunas.
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