Técnica asséptica Graduação em Biotecnologia Disciplina de Técnicas Instrumentais Técnica asséptica Prof. Fabricio Rochedo Conceição fabricio.rochedo@ufpel.edu.br fabriciorc@pop.com.br 10 de junho de 2011

*** O ar está repleto de poeira, microrganismos e esporos e você não vai querê-los dentro de seus frascos, cultivos, reações ... A técnica asséptica ... Forma de trabalho que visa reduzir o risco de contaminação Deve ser usada em qualquer procedimento de laboratório Apresenta falhas, portanto, não previne completamente todas as contaminações; entretanto, quanto melhor for a sua técnica, menor será o seu índice de contaminação!

Os 7 mandamentos... A área de trabalho deve estar o mais longe possível da porta, ar condicionado e da área de tráfego das pessoas. Janelas fechadas! Área de trabalho livre. Remova todos os itens desnecessários! Limpar a área de trabalho, antes e após o uso, com etanol 70%. Mantenha uma pisseta perto da área de trabalho! Certificar que ponteiras, pipetas, frascos... estejam estéreis. Fita para autoclave! Organize a área de trabalho. Destro x Canhoto! Tenha tudo o que precisa à mão. Quanto mais você circular, maior será a perturbação do ar! Lave as mãos antes e após o trabalho. Luvas!

Dicas Planejamento Minimize Abrir frascos inclinando-os 45° Flambe pipetas de vidro e frascos abertos antes da manipulação. Fixação! Evite distrações e interrupções Distâncias para evitar movimentos desnecessários Exposição Movimentos, eles criam correntes de ar. Trabalhe gentilmente Despejar líquidos de forma abrupta

CABINE DE SEGURANÇA BIOLÓGICA (CSB) “Banco de fluxo laminar” “Gabinetes de biossegurança” As cabines de segurança biológica (CSB) são geralmente usadas como contenção primária no trabalho com agentes de risco biológico, minimizando a exposição do operador, do produto e do ambiente

CLASSES DE CSB II III I

CABINE DE SEGURANÇA BIOLÓGICA CLASSE II Filtro HEPA Fluxo de ar laminar Fluxo de ar direcional

Como usar a cabine? “Os 14 mandamentos” 1- Fechar o “sash” – vidro frontal 2- Ligar UV por aproximadamente 10 min 3- Desligar UV, abrir lentamente o “sash” até a altura ideal de trabalho e ligar a luz fluorescente 4- Ligar a cabine (motor) e deixar operar por 5 min 5- Lavar as mãos e antebraços com antisséptico, utilização obrigatória de jaleco e se necessário EPIs

Como usar a cabine? 6- Desinfetar a superfície interna da cabine com etanol 70% e esperar secar 7- Somente carregue o material necessário para o procedimento 8- Não obstruir as grades frontais e traseiras de retorno de ar 9- Após carregar a cabine, espere 2-3 min para iniciar o trabalho 10- Não é recomendado o uso de chama (bico de Bunsen)

Como usar a cabine? 11- Após completar o trabalho, a cabine deve operar durante 2-3 min 12- Desinfecção com álcool 70% 13- Desligar luz fluorescente e o motor da cabine, ligar a UV se apropriado 14- Antissepsia das mãos e braços

Dicas de trabalho Planejamento Evitar o trânsito durante a utilização, principalmente abrir e fechar portas Manter todos os materiais a pelo menos 10 cm dentro do caixilho Separar o material limpo do contaminado na área de trabalho Evitar o movimento de materiais contaminados dentro da área limpa Realize todas as operações contaminadas na parte traseira da área de trabalho

Dicas de trabalho O material contaminado para descarte na região traseira da cabine Manter caixas de tips, eppendorfs e outros materiais estéreis fechadas, abrir somente quando necessário Evite passar as mãos por cima de materiais estéreis, sempre manipular por trás ou pelas laterais Evitar a utilização de chama aberta Evitar a exposição de plásticos a UV (micropipetas) Não utilizar desinfetantes com alta [ ] de Cl livre

Manutenção Semanalmente Mensalmente Anualmente Desinfecção com etanol 70% Limpar a superfície da lâmpada UV Mensalmente Com pano úmido, limpe as superfícies externas da cabine Remova a superfície de trabalho e desinfete com etanol 70% Anualmente Recertificação por um qualificador Substituir a lâmpada UV

Dúvidas??? Manual de instruções

Obrigado!!!