INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO Detecção, quantificação e caracterização dos anticorpos e seu uso como ferramenta para pesquisa e diagnóstico

INTERAÇÕES Reações reversíveis. Ligações não covalentes: Pontes de hidrogênio Interações hidrofóbicas Interações de Van der Waals Ligações iônicas

MÉTODOS Reagentes não marcados Reação de precipitação Reação de aglutinação 2) Reagentes marcados RIA ELISA Imunofluorescência Western Blotting

MÉTODOS PRECIPITAÇÃO APLICAÇÕES AGLUTINAÇÃO IMUNOENSAIOS - Pesquisa - Imunodifusão AGLUTINAÇÃO - Aglutinação direta e indireta - Inibição da aglutinação - Teste de Coombs IMUNOENSAIOS - RIA - ELISA - Imunofluorescência e Citometria de Fluxo Western Blotting APLICAÇÕES - Pesquisa - Diagnóstico - Soroepidemiologia

PRECIPITAÇÃO X AGLUTINAÇÃO Formação de complexos Ag/Ac. Aglutinação: É o agrupamento de partículas, usualmente por moléculas de Ac que se ligam a Ag na superfície de partículas adjacentes. As reações de precipitação e de aglutinação decorrem, respectivamente da ligação entre o Ac e Ag solúvel e particulado.

REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO Ac + Ag multivalente particulado Título: maior diluição que ainda causa aglutinação (semi-quantitativo) Agregação visível de partículas = Eritrócitos, bactérias, fungos e látex

AGLUTINAÇÃO DIRETA Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO) Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação 1) Amostra de sangue na placa teste: 2) Reagente (anticorpo anti A, B): 7

AGLUTINAÇÃO DIRETA 4) Mistura-se: 3) Controle negativo: 8

AGLUTINAÇÃO DIRETA 5) Leitura do resultado: negativo positivo Um resultado positivo é indicado por uma aglutinação visível (aglomeração dos eritrócitos na placa teste), como ilustrado acima. 9

Partículas revestidas com hCG INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO Exemplo: presença de hCG na urina (gravidez) Resultado negativo: (ausência de hCG na urina). Ocorre aglutinação, pois os anticorpos anti-hCG não são bloqueados na incubação inicial, porque não havia o hormônio na urina. Livres, podem aglutinar as partículas revestidas de hCG. + Soro anti - hCG Urina São incubados e colocados numa placa Adicionam-se Partículas revestidas com hCG Resultado positivo: (presença de hCG na urina): não ocorre aglutinação. Ac se ligaram no hCG da urina, (ficando bloqueados), na incubação inicial 11

TESTE DE COOMBS Ac antiimunoglobulinas (Robert Coombs); DHRN – mãe produz IgG anti-Rh; Não aglutinam os eritrócitos; Direto: Ac ligados aos eritrócitos fetais; Indireto: Ac anti-Rh não aglutinantes no soro materno. Permite detectar incompatibilidades Rh, prevenindo contra DHRN.

IMUNOENSAIOS Reagentes marcados (enzimas, fluorocromos, isótopos) Tipos: RIA ELISA IFA / CITOMETRIA DE FLUXO WESTERN BLOTTING

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