FUNÇÕES DE MICRORGANISMOS NÃO CULTIVÁVEIS

“O mundo microbiano contém uma grande diversidade de organismos, estruturas e funções. Este trabalho surge pela dificuldade de muitos microrganismos não serem cultiváveis e por isso mesmo impossíveis de estudar pelas metodologias tradicionais da microbiologia. Os avanços recentes no estudo dos genomas e o desenvolvimento de tecnologias que permitem aceder directamente ao DNA sem necessidade de cultivar os organismos, têm vindo a fornecer novas luzes sobre esta diversidade escondida” Prof. António Correia, Univ. de Aveiro

O que são microrganismos não cultiváveis?

Conteúdo celular do rRNA usado como medição de taxa de crescimento Nem sempre se verifica para microrganismos com crescimento lento Por exemplo, os quimiolitoautotróficos aeróbios, oxidantes de nitrato e amónia retêm elevados níveis de rRNA celular em períodos de latência ou de inibição de crescimento

Novas técnicas desenvolvidas para o estudo de microrganismos não cultiváveis FISH (Fluorescence in Situ Hybridization) Técnica do Microarray Microautoradiografia PCR amplificação (Polymerase Chain Reaction) Quantitative Dot Blot Isótopos estáveis

FISH É uma técnica pela qual um segmento de DNA conjugado previamente com um fluorocromo (sonda) hibridiza numa metafase ou interfase com determinado cromossoma

Microarray Permite verificar os níveis de expressão de diferentes proteínas, independentemente do seu ponto isoeléctrico

Microautoradiografia A microautoradiografia tem sido usada para visualizar e contar células dentro das comunidades microbianas que podem integrar os substratos marcados radioactivamente

FISH-Microautoradiografia

PCR A reacção em cadeia da polimerase é um método de amplificação de DNA sem o uso de um organismo vivo

Quantitative Dot Blot É a análise da expressão proteica em células e em tecidos

Isótopos estáveis A sua utilização na pesquisa de DNA permite estabelecer ligações entre as identidades microbianas e as suas respectivas funções. A sua investigação consiste na colheita de substratos 13C DNA através da centrifugação (gradiente de densidade). Não emitem radiações

Nitrospira Bactéria não cultivável Proveniente de aguas residuais de ETARs Mais de 80% da população de Nitrospira está activa num ambiente de lamas activadas. Cresce exponencialmente com piruvato mas não acetato, na presença de oxigénio. Inactiva sob condições desnitrificantes e de fermentação

Nitrospira

A importância de microrganismos não cultiváveis para o ambiente

Diversidade microbiana como indicador da qualidade do solo

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FIM Ana Rita Domingues Filipa Manzoni João Canas Ramalheiro Vasco Rosa Santos