Técnicas de microscopia de contraste Contraste : interações luz e matéria Técnicas de microscopia de contraste       Fluorescência; Luz polarizada; Contraste de fase; Campo escuro; Contraste interferencial. Em amostras que dão contraste de até 3%, estas técnicas melhoram o contraste, permitindo a visualização pelo olho humano.

Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria Transmissão = luz + fluorescência – (absorção + refração + reflexão) fluorescência refração absorção LUZ reflexão

Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria   Espectro de luz visível  (quanto maior o l, menor a energia)      

1ª interação ao entrar no tecido dentro do tecido     i AR AR e/ou   = menor intensidade de luz transmitida  TECIDO TECIDO

Quais interações resultam nesta imagem? Contraste : interações luz e matéria Quais interações resultam nesta imagem?

Propriedades fundamentais da luz - intensidade; - freqüência; - coerência; - polarização. Onda Vetor campo elétrico E l 1 5 y 1,5 2 4 2 4 x 3 3 l/4 l/4 l/4 l/4 Polarização é a natureza vetorial da luz

Contraste : interações luz e matéria Contraste: tipos de amostra 1) Amplitude: alteram a intensidade da luz transmitida. Amostras transparentes coradas causam o mesmo efeito. 2) Fase: não absorvem luz, mas causam mudança de fase nos comprimentos de onda que a atravessam. Amostra transparente Amostra tipo amplitude Amostra tipo fase Amostra tipo misto (maioria)

Interferência construtiva Onda A Resultante Sem retardo de fase: amplitude aumentada Onda B Interferência construtiva Resultante Onda A Retardo de fase de 90º: amplitude reduzida Onda B Interferência construtiva Onda A Resultante Retardo de fase de 180º: amplitude zero Onda B Interferência destrutiva

Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria   Tipos de reflexão          regular difusa

Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria   reflexão regular; transmissão; absorção          

Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria   reflexão regular; pouca transmissão; absorção.          

Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria   reflexão regular; transmissão; absorção.          

Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria   Tipos de reflexão          Difusa Regular

Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz   Transmissão         

Contraste : interações luz e matéria   Reflexão          1 4 5 2 3 6

Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria   Reflexão e Transmissão         

Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz   Na face oclusal

Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria Fluorescência   Fluorescência Aminoácidos fluorescentes - Tirosina; - Fenilalanina; - Triptofano. lexcit 275 nm 260 nm 295 nm lemiss 304 nm 282 nm 353 nm Compostos aromáticos fluorescentes porfirinas (sangue, pigmentos naturais, bactérias). lexcit 390-440 nm lemiss 615 nm e 675 nm

Contraste : interações luz e matéria Fluorescências dos tecidos dentais duros excit ótima emiss máx cromóforo Dentina# 380 nm 440 nm ? Esmalte# 280 nm 420 nm ditirosina Cálculo dental* 407 nm 604 e 656 nm hematoporfirina dicátion 416 nm 617 e 669 nm 431 nm 635 e 683 nm # Zijp, Optical propeties of hard dentasl tissues, Thesis, 2001; * Reis et al., Applied Spectr. 2001;

Contraste : interações luz e matéria Fluorescências dos tecidos dentais duros Observar comportamento Gaussiano das curvas de fluorescência

Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz  Fluorescência