Efeito do tempo de crescimento e temperatura de cultivo na produção de queratinase por fermentação em estado sólido utilizando penas de frango pelo Aspergillus alliaceus Marcelo T. Ussami1,Nadir R. Marcondes1, Nereida M. da Rosa Gioppo1, Patricia Albert1, Marina K. Kadowaki1, Rosane M. Peralta2 1 - Curso de Farmácia; Universidade Estadual do Oeste do Paraná. Caixa Postal 701, CEP: Cascavel, Paraná, Brasil Departamento de Bioquímica; Universidade Estadual de Maringá Palavras-chaves: queratinase, penas de frango, Aspergillus INTRODUÇÃO Penas de galinhas constituem um resíduo incômodo produzido em grandes quantidades nas indústrias que trabalham com aves e sua utilização pode ter significativo valor econômico e ecológico, no último caso reduzindo a poluição (El-Naghy et al,1998). Proteases queratinolíticas podem ter grande importância em aplicações biotecnológicas como enriquecimento enzimático da farinha/refeição de penas e produção de aminoácidos ou peptídeos com substratos de alto-peso-molecular ou na indústria de couro (El-Refai et al, 2005). No entanto, as penas são normalmente utilizadas de forma limitada como suplemento protéico em dietas para alimentação animal porque o processo que faz/enriquece nutricionalmente a farinha/refeição é custoso, requerendo grandes gastos com energia elétrica. O uso de microrganismos produtores de proteases com atividade queratinolítica é um método alternativo para aumentar o valor nutritivo das penas. OBJETIVOS Este trabalho teve como objetivo estudar o efeito do tempo de crescimento e temperatura de cultivo na produção de queratinase por fermentação em estado sólido de penas, utilizando o fungo Aspergillus alliaceus. METODOLOGIA Para determinar o tempo de crescimento, 0,5 g de penas trituradas foram umedecidas (100% de umidade) com solução mineral mínima ( SMM ) contendo: 0,5 g de MgSO4; 1,0 g de K2HPO4 e 0,46 g de KH2PO4 em 1 L de água e pH 6,5. Os frascos, em duplicata, foram incubados a 25º C com tempos variando de 1 a 10 dias. Após incubação foi adicionado 20 mL de água destilada e os frascos agitados por 30 minutos em shaker a 150 rpm. O conteúdo foi filtrado e utilizado como extrato enzimático para dosar queratinase (Método queratina azure) e proteína (Método de Lowry e col. 1951). Para determinar a temperatura ótima de cultivo, os experimentos foram realizados nas mesmas condições do experimento anterior sendo que a temperatura de incubação das culturas variou de 25 a 45ºC. RESULTADOS E DISCUSSÃO A figura 1 apresenta os resultados da atividade específica de queratinase do Aspergillus alliaceus em relação ao tempo de incubação. Verificou-se que a maior atividade queratinolítica foi produzida no 7º dia com 3372 U/mg. A temperatura ótima de cultivo foi a 30ºC em que o fungo apresentou melhor produção de protease com atividade queratinolítica de 3841 U/mg induzido com pena de frango (figura 2). Figura 1. Efeito do tempo de crescimento na produção de queratinase do A. alliaceus. Figura 2. Efeito da temperatura de cultivo na produção de queratinase pelo A. alliaceus. CONCLUSÃO O fungo Aspergillus alliaceus mostrou ser um ótimo produtor de proteases com atividade queratinolítica nas condições estudadas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS El-Naghy, M. A.; el-Katny, M. S.; Fadl-Allah, E. M.; Nazeer, W.W.(1998), Degradation of chicken feather by Chrysosporium gergoviae. Mycopathologia, v. 143, n.2, p El-Refai, H. A., AbdelNaby, M. A., Gaballa, A., El-Araby, M. H.and Abdel Fattah, A.F Improvement of the newly isolated Bacillus pumilus FH9 keratinolytic activity.- Process Biochem. 40: Lowry e col. 1951