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Interações Antígeno-Anticorpo
Ana Cláudia Carvalho Gouveia
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Interações Ag - Ac Ligações não covalentes Reversíveis
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Características das interações Ag-Ac
Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).
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Características das interações Ag-Ac
Avidez - Força de interações total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos Especificidade - Capacidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ags.
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Características das interações Ag-Ac
Reação cruzada - Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente semelhantes - Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares.
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Métodos Reagentes não marcados Reação de aglutinação
(A ligação do Ac altera o estado físico do Ag) Reação de aglutinação Reação de precipitação Reagentes marcados RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting
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Reação de aglutinação (Ag insolúvel) Direta eritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungos Passiva látex Qualitativos Semi-quantitativos Ex.: classificação sanguinea Ex.: detectar infecções
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Tipagem sanguínea
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Inibição da Aglutinação
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Reação de precipitação
Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac. A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado também aumenta até um máximo, para depois diminuir. Precipitado visível
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Precipitação em solução
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Precipitação em gel Imunodifusão Radial
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Precipitação em gel Imunodifusão Dupla
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Reagentes marcados Enzimas, fluorocromos, isótopos Tipos: RIA ELISA
IF, citometria de fluxo Western Blotting
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Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com radioisótopos para quantificar os ensaios. • Vantagens: – Alta sensibilidade – Permite medidas rápidas e precisas • Desvantagens: – Custo – Vida média dos reagentes – Risco operacional (radiação)
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ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
- Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada com complexos imunes.
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Imunofluorescência - Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoras chamadas fluorocromos. Visualização em microscópio de fluorescência
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Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE
Ficoeritrina (FE) VERMELHA
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Imunofluorescência Direta
Aplicações: Detecção direta de microrganismos (secreções, urina, cortes de tecidos); Identificação de subpopulações de linfócitos; Fenotipagem de células tumorais Ex.: Detecção de Chlamydia trachomatis em secreção uretral
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Imunofluorescência Indireta
Aplicações: Detecção de anticorpos específicos contra diversos microrganismos; Diagnóstico de doenças auto-imunes; Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi Detecção de Ac anti-nuclear
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Citometria de fluxo Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo; Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente; As células são então analizadas no citômetro de fluxo.
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Citometria de fluxo As células saem de uma célula de fluxo e são iluminadas por um raio laser; A quantidade de raios laser que é dispersa para fora das células durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informação a respeito do tamanho das células.
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- O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.
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Caracterização de populações celulares; Contagem de microrganismos;
CD4 CD8 CD19 Aplicações: Caracterização de populações celulares; Contagem de microrganismos; Separação de populações celulares de acordo com a densidade dos antígenos, tamanho e granulosidade das células; - Análise de proliferação celular.
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Western Blot
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Ensaios imunocromatográficos
Teste rápido de HIV (Ac anti-HIV) Diagnóstico de gravidez ( detecção de beta HCG)
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Técnicas de Biologia Molecular
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Reação da Polimerase em Cadeia
Amostra + Reagentes
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RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction)
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Termociclador
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Detecção da Amplificação
Eletroforese em gel de poliacrilamida Produto (PCR ou RT-PCR)
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Relatório Qual a principal diferença entre os métodos de ELISA e imunofluorescência? 2. Em uma tipagem sanguínea houve aglutinação ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguíneo e faça um esquema explicando a reação ocorrida. Quais as características do anticorpo que podem influenciar a sua ligação ao antígeno? Ao realizar os exames pré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como você interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reação ocorrida. Qual imunoensaio você escolheria para o acompanhar o prognóstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.
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