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INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO Detecção, quantificação e caracterização dos anticorpos e seu uso como ferramenta para pesquisa e diagnóstico.

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1 INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO Detecção, quantificação e caracterização dos anticorpos e seu uso como ferramenta para pesquisa e diagnóstico

2 INTERAÇÕES Reações reversíveis Reações reversíveis. Ligações não covalentes: - Pontes de hidrogênio - Interações hidrofóbicas - Interações de Van der Waals - Ligações iônicas

3 MÉTODOS 1)Reagentes não marcados Reação de precipitação Reação de aglutinação 2) Reagentes marcados RIA ELISA Imunofluorescência Western Blotting

4 MÉTODOS PRECIPITAÇÃO PRECIPITAÇÃO - Imunodifusão AGLUTINAÇÃO AGLUTINAÇÃO - Aglutinação direta e indireta - Inibição da aglutinação - Teste de Coombs IMUNOENSAIOS IMUNOENSAIOS - RIA - ELISA - Imunofluorescência e Citometria de Fluxo - Western Blotting APLICAÇÕES - - Pesquisa - Diagnóstico - Soroepidemiologia

5 PRECIPITAÇÃO X AGLUTINAÇÃO Precipitação: Precipitação: Formação de complexos Ag/Ac. Aglutinação: Aglutinação: É o agrupamento de partículas, usualmente por moléculas de Ac que se ligam a Ag na superfície de partículas adjacentes. As reações de precipitação e de aglutinação decorrem, respectivamente da ligação entre o Ac e Ag solúvel e particulado.

6 Ac + Ag multivalente particulado Título: maior diluição que ainda causa aglutinação (semi-quantitativo) Agregação visível de partículas = Eritrócitos, bactérias, fungos e látex REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO

7 7 2) Reagente (anticorpo anti A, B): AGLUTINAÇÃO DIRETA 1) Amostra de sangue na placa teste: Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO) Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação

8 8 3) Controle negativo: 4) Mistura-se: AGLUTINAÇÃO DIRETA

9 9 5) Leitura do resultado: Um resultado positivo é indicado por uma aglutinação visível (aglomeração dos eritrócitos na placa teste), como ilustrado acima. negativo positivo AGLUTINAÇÃO DIRETA

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11 11 Exemplo: presença de hCG na urina (gravidez) INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO + Soro anti - hCG Urina São incubados e colocados numa placa Adicionam-se Partículas revestidas com hCG Resultado positivo: (presença de hCG na urina): não ocorre aglutinação. Ac se ligaram no hCG da urina, (ficando bloqueados), na incubação inicial Resultado negativo: (ausência de hCG na urina). Ocorre aglutinação, pois os anticorpos anti-hCG não são bloqueados na incubação inicial, porque não havia o hormônio na urina. Livres, podem aglutinar as partículas revestidas de hCG.

12 TESTE DE COOMBS Ac antiimunoglobulinas (Robert Coombs); DHRN – mãe produz IgG anti-Rh; Não aglutinam os eritrócitos; Direto: Ac ligados aos eritrócitos fetais; Indireto: Ac anti-Rh não aglutinantes no soro materno. Permite detectar incompatibilidades Rh, prevenindo contra DHRN.

13 Reagentes marcados (enzimas, fluorocromos, isótopos) Tipos: - RIA - ELISA - IFA / CITOMETRIA DE FLUXO - WESTERN BLOTTING IMUNOENSAIOS

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