INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO

Apresentação em tema: "INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO"— Transcrição da apresentação:

1 INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO
Detecção, quantificação e caracterização dos anticorpos e seu uso como ferramenta para pesquisa e diagnóstico

2 INTERAÇÕES Reações reversíveis. Ligações não covalentes:
Pontes de hidrogênio Interações hidrofóbicas Interações de Van der Waals Ligações iônicas

3 MÉTODOS Reagentes não marcados Reação de precipitação
Reação de aglutinação 2) Reagentes marcados RIA ELISA Imunofluorescência Western Blotting

4 MÉTODOS PRECIPITAÇÃO APLICAÇÕES AGLUTINAÇÃO IMUNOENSAIOS - Pesquisa
- Imunodifusão AGLUTINAÇÃO - Aglutinação direta e indireta - Inibição da aglutinação - Teste de Coombs IMUNOENSAIOS - RIA - ELISA - Imunofluorescência e Citometria de Fluxo Western Blotting APLICAÇÕES - Pesquisa - Diagnóstico - Soroepidemiologia

5 PRECIPITAÇÃO X AGLUTINAÇÃO
Formação de complexos Ag/Ac. Aglutinação: É o agrupamento de partículas, usualmente por moléculas de Ac que se ligam a Ag na superfície de partículas adjacentes. As reações de precipitação e de aglutinação decorrem, respectivamente da ligação entre o Ac e Ag solúvel e particulado.

6 REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO
Ac + Ag multivalente particulado Título: maior diluição que ainda causa aglutinação (semi-quantitativo) Agregação visível de partículas = Eritrócitos, bactérias, fungos e látex

7 AGLUTINAÇÃO DIRETA Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação
Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO) Células ou partículas insolúveis Ac = Aglutinação 1) Amostra de sangue na placa teste: 2) Reagente (anticorpo anti A, B): 7

8 AGLUTINAÇÃO DIRETA 4) Mistura-se: 3) Controle negativo: 8

9 AGLUTINAÇÃO DIRETA 5) Leitura do resultado:
negativo positivo Um resultado positivo é indicado por uma aglutinação visível (aglomeração dos eritrócitos na placa teste), como ilustrado acima. 9

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11 Partículas revestidas com hCG
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO Exemplo: presença de hCG na urina (gravidez) Resultado negativo: (ausência de hCG na urina). Ocorre aglutinação, pois os anticorpos anti-hCG não são bloqueados na incubação inicial, porque não havia o hormônio na urina. Livres, podem aglutinar as partículas revestidas de hCG. + Soro anti - hCG Urina São incubados e colocados numa placa Adicionam-se Partículas revestidas com hCG Resultado positivo: (presença de hCG na urina): não ocorre aglutinação. Ac se ligaram no hCG da urina, (ficando bloqueados), na incubação inicial 11

12 TESTE DE COOMBS Ac antiimunoglobulinas (Robert Coombs);
DHRN – mãe produz IgG anti-Rh; Não aglutinam os eritrócitos; Direto: Ac ligados aos eritrócitos fetais; Indireto: Ac anti-Rh não aglutinantes no soro materno. Permite detectar incompatibilidades Rh, prevenindo contra DHRN.

13 IMUNOENSAIOS Reagentes marcados (enzimas, fluorocromos, isótopos)
Tipos: RIA ELISA IFA / CITOMETRIA DE FLUXO WESTERN BLOTTING

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