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Interações Antígeno-Anticorpo Ana Cláudia Carvalho Gouveia.

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Apresentação em tema: "Interações Antígeno-Anticorpo Ana Cláudia Carvalho Gouveia."— Transcrição da apresentação:

1 Interações Antígeno-Anticorpo Ana Cláudia Carvalho Gouveia

2 Interações Ag - Ac Ligações não covalentes Reversíveis Reversíveis

3 Características das interações Ag-Ac Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).

4 Características das interações Ag-Ac Avidez - Força de interações total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos Especificidade - Capacidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ags.

5 Características das interações Ag-Ac Reação cruzada - Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente semelhantes - Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares.

6 Métodos Reagentes não marcados (A ligação do Ac altera o estado físico do Ag) Reação de aglutinação Reação de precipitação Reagentes marcados RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting

7 Reação de aglutinação Direta eritrócitos ( hemaglutinação ), bactérias, fungos Passiva látex (Ag insolúvel) QualitativosSemi-quantitativos Ex.: classificação sanguineaEx.: detectar infecções

8

9 Inibição da Aglutinação

10 -Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac. Precipitado visível Reação de precipitação -A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado também aumenta até um máximo, para depois diminuir.

11 Precipitação em solução

12 Precipitação em gel Imunodifusão Radial

13 Precipitação em gel Imunodifusão Dupla

14 Reagentes marcados - Enzimas, fluorocromos, isótopos - Tipos: RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting

15 Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com radioisótopos para quantificar os ensaios. Vantagens: – Alta sensibilidade – Permite medidas rápidas e precisas Desvantagens: – Custo – Vida média dos reagentes – Risco operacional (radiação)

16 ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) - Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada com complexos imunes.

17

18 Imunofluorescência - Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoras chamadas fluorocromos. - Visualização em microscópio de fluorescência

19 Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE Ficoeritrina (FE) VERMELHA

20 Imunofluorescência Direta Aplicações: - Detecção direta de microrganismos (secreções, urina, cortes de tecidos); - Identificação de subpopulações de linfócitos; - Fenotipagem de células tumorais Ex.: Detecção de Chlamydia trachomatis em secreção uretral

21 Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi Aplicações: - Detecção de anticorpos específicos contra diversos microrganismos; - Diagnóstico de doenças auto-imunes; Detecção de Ac anti-nuclear Imunofluorescência Indireta

22 Citometria de fluxo - Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo; - Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente; - As células são então analizadas no citômetro de fluxo.

23 - As células saem de uma célula de fluxo e são iluminadas por um raio laser; Citometria de fluxo - A quantidade de raios laser que é dispersa para fora das células durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informação a respeito do tamanho das células.

24 - O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.

25 Aplicações: -Caracterização de populações celulares; - Contagem de microrganismos; - Separação de populações celulares de acordo com a densidade dos antígenos, tamanho e granulosidade das células; - Análise de proliferação celular. CD4 CD8 CD19

26

27 Western Blot

28 Ensaios imunocromatográficos Teste rápido de HIV (Ac anti-HIV) Diagnóstico de gravidez ( detecção de beta HCG)

29 Técnicas de Biologia Molecular

30 Reação da Polimerase em Cadeia Amostra + Reagentes

31 RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction)

32 Termociclador

33 Detecção da Amplificação Produto (PCR ou RT-PCR) Eletroforese em gel de poliacrilamida

34 1.Qual a principal diferença entre os métodos de ELISA e imunofluorescência? 2. Em uma tipagem sanguínea houve aglutinação ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguíneo e faça um esquema explicando a reação ocorrida. 3.Quais as características do anticorpo que podem influenciar a sua ligação ao antígeno? 4.Ao realizar os exames pré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como você interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reação ocorrida. 5. Qual imunoensaio você escolheria para o acompanhar o prognóstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta. Relatório


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