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Imunologia no Quadro da Patologia e Análises Clínicas Importância da Detecção de Ag e AC: 1.Elucidar processos patológicos 2.Diferenciar as fases das doenças.

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1 Imunologia no Quadro da Patologia e Análises Clínicas Importância da Detecção de Ag e AC: 1.Elucidar processos patológicos 2.Diferenciar as fases das doenças 3.Selecionar Doadores de Sangue 4.Selecionar doadores e receptores de órgãos transplantados 5.Avaliar o prognóstico das doenças 6.Avaliar a eficácia da terapêutica e da suspensão da terapêutica

2 Testes Sorológicos Chamados Imunoensaios Marcados Não marcados Multiparamétricos Respeitar Regras 1.Controle Rigoroso 2.Técnicas Padronizadas 3.Controle de Qualidade Algumas técnicas usadas Eletroforese Imunoblotting Citometria de Fluxo Imunofluorescência PCR / Real Time PCR Precipitação / Imunodifusão Aglutinação ELISA RIA Nefelometria Turbidimetria Automação

3 Eletroforese (SDS-PAGE)

4 Transferência Papel filtro Gel/ membrana/ filtro Tampão ( +) ( - ) Gel Membrana transferência preenchimento suporte

5

6 Imunoblotting ou Western Blotting (proteínas ou glicoproteínas) 1.SDS-PAGE 2. Transferência 3. Bloqueio (BSA ou Leite) 4. Solução AC 5. Quimioluminescência ou Iodo Revelação 7. Densitometria óptica Determinação [proteínas] Imunoprecipitação: Anticorpo h Proteína-A Sepharose Lavagem Centrifugação Tampão Laemnli SDS-PAGE Anticorpo (Overnight) Proteína-A 126 I Densitometria Óptica das bancas Amostra

7 interesse Imunofluorescência 3 Tipos: 1.Direto: Passos 1 e 2 (Ac marcado com fluorocromo). Usado para pesquisa de AC em células (imunocitoquímica) e tecidos (imunohistoquímica) Ex da aplicabilidade: biópsia de doenças imunológicas (pele, rins, sífilis, herpes simples, varicela-zoster) 2. Indireto: Usado para aumentar a sensibilidade do método Passos 1, 2 e 3 3. Sistema Avidina-Biotina: Técnica de amplificação Avidina+Biotina = complexo Avidina pode ser saturada com fluoresceína (verde), ficoeritina (vermelha), peroxidase (M. óptica), ferritina (M. eletrônica). Várias biotinas podem se ligar ao AC = amplificação da fluorescência


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