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UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi.

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1 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi UICC HPV e CÂNCER CERVICAL CURRÍCULO

2 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 01 Capítulo 2.d Triagem e diagnóstico - Análise e tipagem de HPV Prof. Suzanne Garland MD Diretora de Pesquisa Microbiológica, Chefe de Microbiologia Clínica e Doenças Infecciosas Hospital Real de Mulheres Melbourne, Austrália Associado Prof. Sepehr Tabrizi Cientista de Pesquisa Sênior, Departamento de Microbiologia Hospital Real de Mulheres Melbourne, Austrália

3 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 02 Partículas semelhantes a Vírus (VLP) Análogos não infecciosos de um vírus patogênico VLP-L1 se une in vitro a capsídeos vazios ou VLPs Produção de VLP não padronizada Sistemas diferentes de expressão, métodos preparativos, abordagens de controle de qualidade Formatos de identificação variam (direto vs. indireto) Sem padrão ouro para estabelecimento de limite para resultado positivo Poucas comparações entre laboratórios

4 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 03 Partículas semelhantes a Vírus (VLP) VLPs podem ser analisadas utilizando técnicas de microscopia eletrônica

5 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 04 Detecção de anticorpo para HPV Anticorpos A presença representa infecção passada ou presente Pode ser gerado contra proteínas de HPV precoces (E) ou proteínas tardias (L) Anticorpos neutralizantes L1 se correlacionam com proteção iniciada por vacina

6 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 05 Detecção de anticorpo para HPV Vários ensaios foram desenvolvidos para detectar anticorpos no soro/mucosa Teste imunoabsorvente de ligação a enzima (ELISA): medidas de Ig total, neutralizantes e não neutralizantes Testes de ligação competitiva, por exemplo, teste Luminex competitivo (cLIA): medidas de Ig neutralizantes a um epítopo apenas, mas a todas as classes de Ig Teste de pseudovírus: medidas de Ig neutralizantes total, todas as subclasses Western blot Radio-imuno precipitação

7 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 06 Detecção de DNA do HPV por microscopia no tecido Imuno-histoquímica (antígeno específico para o grupo) Exame Papanicolau: detecta células precursoras de câncer

8 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 07 Técnicas de Detecção Molecular para DNA do HPV Métodos de Amplificação Amplificação de sinal Captura Híbrida (HC2) Amplificação Alvo Reação em cadeia da polimerase - DNA do HPV por PCR RNAm do HPV

9 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 08 Teste de Captura Híbrida 2 Teste aprovado atualmente pelo FDA formato de tubo em 1995; formato de microtitulação em 1999 Destinado para trabalhar com amostra de célula cervical esfoliada Kit de coleta recomendado inclui escova e meio de transporte de amostra Coleta de células endo e ectocervicais

10 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 09 Teste de Captura Híbrida 2 Sensibilidade de 5000 genomas/amostra Sonda para detecção de HPV de baixo risco HPV dos tipos 6, 11, 42, 43, 44 Sonda para HPV de alto risco HPV dos tipos 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 e 68 Resultados não específicos ao tipo Sem controle para entrada do número de células Boa comparação entre laboratórios

11 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 10 Reação em cadeia da polimerase Muito sensível em cerca de 1 a 10 cópias / células Permite o teste de vários tipos de amostra Permite o teste de amostras estocadas com qualidade ruim de DNA Testes de consenso: geralmente com alvo na região L1 Conservado Primers variam: MY09/MY11 SPF1/SPF2 PGMY09/PGMY11 GP5+/GP6+ Detecção de variedade dos sistemas: ELISA dot blot

12 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 11 Diferentes metodologias de PCR Teste AMPLICOR ® para HPV Teste LINEAR ARRAY® para HPV Teste de genotipagem INNO-LiPA ® Genotipagem de HPV em cortes incluídos em parafina Os cortes do tecido podem ser muito antigos e submetidos à degradação do DNA (inclusive durante a extração)

13 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 12 Diferentes metodologias de PCR Formulário do chip de DNA do HPV Microarray para HPV Ensaio de citometria de fluxo

14 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 13 Outras metodologias para detectar os tipos de HPV Tecnologia xMAP® da Luminex Norchip - Proficiência ao HPV

15 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 14 Limitações e desafios Diversa variação de ensaios Sensibilidade e especificidade diferentes Falha de leitura dos controles disponíveis, GQ, CQ

16 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 15 Uso prático de métodos de teste de DNA para HPV Clínico Triagem Triagem de exame Papanicolau equivocados / com valores limítrofes Monitoria de tratamento pós-displasia Epidemiologia Áreas geográficas de vigilância Prevalência do HPV Prevalência do genótipo do HPV Vacina Execução pré e pós vacina Estudos de eficácia para a vacina Diferentes regiões em todo o mundo

17 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 16 Obrigado Esta apresentação está disponível em


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