Reação em cadeia da polimerase

Apresentação em tema: "Reação em cadeia da polimerase"— Transcrição da apresentação:

1 Reação em cadeia da polimerase
Acadêmica :Elisete

2 Reação em cadeia da polimerase (PCR)
Reação em cadeia da polimerase (em inglês Polymerase Chain Reaction - PCR) .

3 Histórico O processo de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR, do inglês Polymerase Chain Reaction) foi desenvolvida em 1983, por Kary Mullis.

4 Como era realizado : PCR era realizado com a enzima da E.Coli

5 Mullis utilizou a então recém descrita.

6 Objetivos É a obtenção de muitas cópias de uma sequência específica de DNA, a partir de uma fita molde.

7 Aplicações Cena de um crime.
Procedimentos científicos de Biologia Molecular como amplificação para gerar mutagênese, detecção de mutações PCR também é utilizada na paleontologia para o sequenciamento gênico de animais pré-históricos.

8 Componentes da PCR

9 Como é feito? Coloca-se o microtubo de ensaio em uma máquina termocicladora que possui como função fazer ciclos de temperaturas pré-estabelecidos com tempos exatos específicos para as reações seguintes da análise.

10 Como é feito? No termociclador ocorrerá um ciclo com 3 etapas: desnaturação, anelamento e extensão.

11 Etapas do ciclo DESNATURAÇÃO: 92C 3’ 5’ + G C

12 Etapas do ciclo Anelamento: resfria-se a 54ºC onde os primers se anelam as duas fitas simples, servindo de iniciadores para a enzima polimerase. 5’ 3’ Forward primer Reverse primer

13 Etapas do ciclo Extensão: Aquece-se novamente o tubo a 72ºC (temperatura ideal de funcionamento da Taq polimerase) para a duplicação da fita. A Taq polimerase inicia, após o final do primer, a colocar os nucleotídeos livres na fita de DNA ligando-os por complementaridade, formando assim uma nova fita dupla.

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15 O processo envolvendo estes três passos pode ser repetido várias vezes (40 a 50 ciclos), sendo possível aumentar, em cada ciclo, duas vezes a concentração de DNA pré-existente.

16 Pontos importantes: Vantagens:
Quantidades mínimas necessárias para o procedimento; Obtenção de uma grande quantidade de produto; Amostra nem sempre puras; Capacidade de amplificar uma única moléculoa de DNA ou RNA; Ferramenta importante para Biotecnologia; Baixo custo.

17 Desvantagens: Facilidade de contaminação da amostra;
Necessidade de conhecer a sequência de DNA a amplificar para que possam ser sintetizados primers específicos; Facilidade de contaminação da amostra; Incorporação errônea de bases durante a replicação; Substâncias que conhecidamente inibem a reação, como é o caso da hemoglobina Demanda mão de obra especializada.