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PROF. MARCELO TEIXEIRA PACHECO UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE AGRONOMIA DEPARTAMENTO DE PLANTAS DE LAVOURA PARTE II.

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1 PROF. MARCELO TEIXEIRA PACHECO UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE AGRONOMIA DEPARTAMENTO DE PLANTAS DE LAVOURA PARTE II

2 TRANSFERÊNCIA DOS GENES CLONADOS PARA A PLANTA PRINCIPAIS MÉTODOS Transformação via Agrobacterium tumefaciens Biolística ou pistola de genes Eletroporação (descarga elétrica)

3 VETOR (veículo) DE TRANSFORMAÇÃO DE TRANSGENES GALHA DA COROA Sintoma infecção por A. tumefaciens Plasmídeo Ti A. tumefaciens TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens

4 Agrobacterium tumefaciens A. tumefaciens Plasmídio Ti T-DNA DNA cromossômico T-DNA Célula vegetal transformada Tumor da galha Cromossomo TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens

5 TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens Célula vegetal

6 Co-cultivo de células da planta com Agrobacterium desarmada Transferência para meio de cultura com antibiótico, herbicida ou outro método de seleção Regeneração da planta transgênica Testes da planta transgênica em laboratório e mais tarde a campo PRINCIPAIS ETAPAS DA TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens

7 Bombardeamento de partículas ou Biolística GENE DE INTERESSE MICROPARTÍCULAS DE OURO DNA ADERE ÀS PARTÍCULAS ACELERAÇÃO DAS PARTÍCULAS LIBERAÇÃO DO DNA NO NÚCLEO SELEÇÃO DAS CÉLULAS TRANSFORMADAS REGENERAÇÃO DAS PLANTAS TRANSGÊNICAS

8 TIPOS DE PISTOLAS DE GENES

9 PISTOLA DE GENES EM AÇÃO CLICAR AQUI PARA VER ANIMAÇÃO (após a animação recarregar a apresentação)

10 EXEMPLO DE TESTE A CAMPO Milho transgênico Bt (Resistente a diferentes insetos) Milho não transgênico

11 Gene de seleção Resistência a antibiótico, Resistência a herbicida, … Gene Bt CASSETE DO GENE Bt UM GENE SIMPLIFICADO Promotor Seqüência de terminação Seqüência codificando gene Bt Controla quando, como e quanto o gene vai ser expresso Contém a informação do que o gene faz Diz onde termina o gene

12 GENES DEVEM SER CONSTRUÍDOS ANTES DE SEREM USADOS NA TRANSFORMAÇÃO DE PLANTAS PROMOTOR, GENE E SEQÜÊNCIA DE TERMINAÇÃO PODEM VIR DE ORGANISMOS DIFERENTES PORQUE A EFICIÊNCIA DE TRANSFERÊNCIA DO TRANSGENE É BAIXA (1 A 5%) É NECESSÁRIO USAR UM GENE MARCADOR PARA SELEÇÃO. (RESISTÊNCIA A ANTIBIÓTICOS E A HERBICIDAS MAIS COMUMENTES USADOS, MAS EXISTEM OUTRAS TÉCNICAS) NECESSÁRIOS VÁRIOS EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO PARA SELECIONAR UM TRANSGÊNICO COM AS CARACTERÍSTICAS DESEJADAS NEM TUDO É TÃO SIMPLES

13 EXEMPLOS DE DIFERENTES EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO BATATA RESISTENTE AO FUNGO Verticillium dahliae Transgênico Não-transgênico Transgênico


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