Imunidade Celular – ly T Citocinas Profa. Alessandra Xavier Pardini Disciplina: Imunologia.

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1 Imunidade Celular – ly T Citocinas Profa. Alessandra Xavier Pardini Disciplina: Imunologia

2 Tipos de resposta

3 Imunidade celular - Mediada por linfócitos T - linfócitos T CD 4 + ou helper – produção de citocinas - eliminação indireta de Ag através de ativação de fagócitos (linfócito Th1e produção de Ac)‏ - linfócitos T CD 8 + ou citotóxico - eliminação direta de Ag

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5 Introdução Os linfócitos T são as células da imunidade celular  resposta Adaptativa = combate os micróbios intracelulares Os linfócitos T são as células da imunidade celular  resposta Adaptativa = combate os micróbios intracelulares Os micróbios podem estar dentro dos fagócitos ou podem infectar células não fagocíticas. Os micróbios podem estar dentro dos fagócitos ou podem infectar células não fagocíticas. Os micróbios devem ser eliminados pelas respostas mediadas por células. Os micróbios devem ser eliminados pelas respostas mediadas por células.

6 Micróbios são ingeridos pelos fagócitos eliminação (1) Micróbios resistentes às atividades microbicidas Podem se replicar nas vesículas dos fagócitos Podem entrar no citoplasma da célula usando os nutrientes (2) O vírus pode se ligar a receptores em uma grande variedade de células São capazes de infectar e replicar dentro do citoplasma

7 Linfócitos maduros Migração para órgãos linfóides secundários APCs migram para linfonodos – apresentação antigênica - ativação Resposta a Ag – migração para tecido

8 Marcadores de superfície TCR moléculas acessórias moléculas de adesão

9 TCR - Estrutura: semelhante a Ig - Função: reconhecimento de Ag apresentado por MHC de classe I ou II - subgrupo - cadeias TCR / - epiderme

10 Moléculas acessórias CD4, CD8, CD2, CD5, CD28 e CD45. ativação linfocitária ligação das células T a outras células Transdução de sinal de ativação para citoplasma

11 CD4 e CD8 - co-receptores de células T - importante papel na restrição de células T pelo MHC - ligam-se a porções invariantes das moléculas de MHC classe I (CD8) e de classe II (CD4) ‏ - transdução de sinais - seleção tímica

12 Ativação linfocitária -  Ag  ativação de  linfócitos T - local – órgãos linfóides secundários - APCs – apresentação antigênica e moléculas co- estimulatórias – ativação linfocitária - Baço – apresentação de Ag presentes no sangue - Tonsilas e placas de Peyer – apresentação de Ag presentes nas mucosas - linfócitos T naive – circulação através do sangue e do tecido linfóide – contato com APCs

13 Linfócitos T H1 -Produção de IL-2, IFN- , TGF-  -Ativação de células envolvidas na imunidade celular > linfócito T CTL > células NK > macrófagos -Proliferam em resposta a Ag virais e bacterianos

14 NK e macrófagos  IL-12, IFN-  e IL-18

15 Linfócitos T H2 -Produção de IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 -Linfócitos B – switching para IgE -Ativação de eosinófilos -Proliferam em resposta a alérgenos e helmintos

16 Mastócito  IL-4

17 Interação entre T H1 e T H2

18 Linfócitos T CTL Reconhecimento de MHC de classe I + Ag Eliminação de Ag intracelulares – virais ou tumorais Molécula acessória CD80

19 Os sinais bioquímicos desencadeados nas células T pelo reconhecimento do antígeno resultam na ativação de vários fatores de transcrição que estimulam a expressão dos genes que codificam as citocinas, os receptores de citocinas e outras moléculas envolvidas nas respostas da célula T. Os sinais bioquímicos desencadeados nas células T pelo reconhecimento do antígeno resultam na ativação de vários fatores de transcrição que estimulam a expressão dos genes que codificam as citocinas, os receptores de citocinas e outras moléculas envolvidas nas respostas da célula T. A resposta imune envolve contato célula a célula, com proliferação celular e produção de fatores solúveis, os quais regulam o funcionamento do sistema imune. A resposta imune envolve contato célula a célula, com proliferação celular e produção de fatores solúveis, os quais regulam o funcionamento do sistema imune.

20 Substâncias chamadas de linfocinas – produzidas somente pelos linfócitos. Substâncias chamadas de linfocinas – produzidas somente pelos linfócitos. Muitos leucócitos produziam estas substâncias, assim como outras células – denominadas citocinas. Muitos leucócitos produziam estas substâncias, assim como outras células – denominadas citocinas. Citocinas: podem agir no local ou em outros sítios. Citocinas: podem agir no local ou em outros sítios.

21 A proliferação do sistema imune ocorre devido a estímulos inespecíficos (mitógenos) e específicos (antígenos diversos). A proliferação do sistema imune ocorre devido a estímulos inespecíficos (mitógenos) e específicos (antígenos diversos). Avaliação “in vitro” – teste de transformação linfoblástica – para quantificar proliferação linfocitária. Avaliação “in vitro” – teste de transformação linfoblástica – para quantificar proliferação linfocitária. Atualmente emprega-se nos estudos a dosagem das citocinas – para avaliar a função celular, definir grupos de células... Atualmente emprega-se nos estudos a dosagem das citocinas – para avaliar a função celular, definir grupos de células... As citocinas conhecidas somam mais de uma centena, têm funções definidas, ativação e regulação da resposta imune celular e humoral. As citocinas conhecidas somam mais de uma centena, têm funções definidas, ativação e regulação da resposta imune celular e humoral.

22 Principais Funções das Citocinas (a) Citocinas pró-inflamatórias Interleucina-1 (IL-1) ‏ Estimula algumas subclasses de células, induz a síntese de TNF- e IL-8. Induz hipertermia. Fator de Necrose Tumoral (FNT-) ‏ Induz a produção de IL-8. Aumento da permeabilidade vascular. Ativa monócitos, neutrófilos. Destruição direta de células infectadas ou malignas. Mediadora do choque séptico. Interleucina-6 (IL-6) Estimula os hepatócitos a produzirem proteínas de fase aguda. Proliferação de ly T e B. Aumento da atividade de fatores de crescimento GM- CSF.

23 (b) Ativação de Th1 Interferon-gama (IFN-) e Interleucina-2 (IL-2) ‏ IFN- ativa macrófagos, NK IL-2 importante para a proliferação de linfócitos T e B, NK (c) Produção de Anticorpos, Células Th2 Interleucina-4 (IL-4), Interleucina-5 (IL-5), Interleucina-10 (IL-10) ‏ São IL na produção de anticorpos, eosinófilos e desativação de células envolvidas na resposta imune. Relacionadas às funções de células Th2. IL-4 estimuladora de células B. IL-4 importante para a diferenciação de célula Th2. IL-5 importante para na proliferação, diferenciação e ativação de eosinófilos = defesa contra helmintos.

24 IL-10 inibe as funções de macrófagos para destruir patógenos e também das citocinas IL-1, IL-8, IL-6, TNF-, IL-12 e dela mesma. IL-10 inibe a ativação de Th1. IL-10 aumenta a proliferação de células B, induz a produção de anticorpos. (d) Interleucina-12 (IL-12) e Interleucina-18 (IL-18) ‏ Importantes na produção de IFN- por linfócitos T. IL-12 estimula a síntese de IFN- e células NK, células T citotóxicas, e células Th1. IL-12 é uma importante citocina na resposta inicial inata. IL-18 é um fator de indução de IFN-

25 3. As citocinas e a Resposta Imune As citocinas são um importante elo de ligação entre as respostas imunes específica e inespecífica. Moléculas de adesão: são importantes pois permitem a passagem de células do sítio intravascular para os tecidos = aumenta a atividade antimicrobicida, citotóxica. ICAM e MAC – presente em macrófagos VCAM e VLA-4 – presente em eosinófilos Estímulo de NK e fagocitose IFN- e IL-2 produzidas por células T, aumentam a capacidade citotóxica de NK

26 IFN- ativa macrófago, aumenta a atividade microbicida IL-12 produzida por macrófagos – diferenciação de Th0 em Th1 e Th2 IL-12 = Th0 em Th1 IL-10 suprime Th0 para Th1 IFN- produzida pela NK modula Th0 em Th2

27 Tabela 1: Principais Citocinas envolvidas na resposta imune. Inibe proliferação celular, antiinflamatórioCondrócitos, monócitos, células T TGF- Induz células T a produzirem IFN- Macrófagos, células de Kupffer, queratinócitos, osteoblastos IL-18 Ativa células NK, induz diferenciação de células CD4 para subclasse TH1 Células B, macrófagosIL-12 Supressor potente de funções de macrófagos Células T, macrófagos, vírus Esptein-Barr IL-10Sem classificação Febre, ativação de células T e macrófagosMacrófagos, células epiteliaisIL-1 Inflamação local, ativação de células endoteliais, monócitos Macrófagos, células NK TNF- TNF Ativação de macrófagos, aumenta a expressão de MHC Antiviral, aumenta a expressão de MHC classe I Células T, células NK Leucócitos Fibroblastos IFN- IFN- IFN- Interferons Proliferação de células T Ativação de células B, switch de IgE Proliferação, diferenciação e ativação de eosinófilos Diferenciação e proliferação de linfócitos T e B, produção de proteínas de fase aguda Estimula o crescimento e a diferenciação de células da linhagem mielocítica Células T Células T, mastócitos Células T, macrófagos Macrófagos, células T IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 GM-CSF Fatores de crescimento AÇÕESCÉLULAS PRODUTORASCITOCINASFAMÍLIA

28 4. Métodos para dosagem de citocinas Vários métodos já foram propostos para dosar as citocinas – detecção direta ou de sua atividade. Por cultura celular Por ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) – método permite dosar citocinas em sobrenadantes de cultura de células mononucleares do sangue periférico estimuladas com um determinado antígeno, in vitro, diretamente do soro de paciente. Pela biologia molecular: detecção de RNA mensageiro das citocinas. Citometria de fluxo (FACS): permite detectar as citocinas e as células que as produzem.

29 Teste de ELISA – técnica de reagente marcado = enzima – para pesquisa de anticorpos ou antígenos. Na atualidade é o modelo de teste mais empregado em bancos de sangue e laboratórios de análises clínicas – vantagem: automação, rapidez, custo, sensibilidade.

30 Citometria de Fluxo

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