MONOGRAFIA: EFEITO DA OUABAÍNA NA RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS EM JUNÇÃO NEUROMUSCULAR Aluna: Luciana Ferreira Leite Orientadora: Profª. Dra. Cristina.

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1 MONOGRAFIA: EFEITO DA OUABAÍNA NA RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS EM JUNÇÃO NEUROMUSCULAR Aluna: Luciana Ferreira Leite Orientadora: Profª. Dra. Cristina Guatimosim Fonseca Laboratório de Biologia da Neurotransmissão

2 JUNÇÃO NEUROMUSCULAR DE RÃ

3 RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
Abreu, B.J.

4 RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS

5 RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS

6 RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
Royle and Lagnado, 2003

7 FM1-43 STAINING + Positive head bridges Lypophilic tail Abreu, B.J.

8 FM1-43 STAINING Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min

9 FM1-43 STAINING Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min

10 FM1-43 DESTAINING Abreu, B.J.

11 COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM
α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995)

12 COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM
α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995) Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996)

13 COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM
α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995) Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996) OUABAÍNA (Adam-Vizi & Ligeti, 1984; Haimann et al, 1985; Prado et al, 1990; Prado et al, 1993; Lomeo et al, 2003).

14 OBJETIVOS Objetivo geral
Investigar o efeito da ouabaína na reciclagem de vesículas sinápticas “ in vivo”

15 OBJETIVOS Objetivos específicos
- Padronizar a técnica de marcação de terminais axônicos com a sonda fluorescente FM1-43. - Investigar o efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas. - Investigar o efeito da ouabaína na endocitose de vesículas sinápticas. - Investigar se a ação da ouabaína é dependente de cálcio extracelular.

16 Marcação e desmarcação dos terminais nervosos com estímulo elétrico
RESULTADOS Marcação e desmarcação dos terminais nervosos com estímulo elétrico A B C 1 terminação / 6 spots

17 Efeito da ouabaína na marcação de terminais nervosos
RESULTADOS Efeito da ouabaína na marcação de terminais nervosos Ouabaína Estímulo elétrico

18 Efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas
RESULTADOS Efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas 34 spots 6 terminações

19 RESULTADOS O efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas é dependente de cálcio extracelular? 68 spots 12 terminações

20 RESULTADOS Efeitos da ouabaína:

21 RESULTADOS Efeitos da ouabaína: Bloqueia a endocitose

22 RESULTADOS Efeitos da ouabaína: Bloqueia a endocitose
Promove a exocitose

23 RESULTADOS Efeitos da ouabaína: Bloqueia a endocitose
Promove a exocitose O efeito da ouabaína é independente de cálcio extracelular

24 PERSPECTIVAS...

25 AGRADECIMENTOS ...

26 OBRIGADA PELA ATENÇÃO!