IX Semana de Biologia da UFPB Mini-curso Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM

Técnicas Microbiológicas Experimentação Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica

Experimentação Atividade Antimicrobiana Níveis de Resistência Cinética Bacteriscida

Remoção do excesso e secagem Atividade Antimicrobiana in vitro BHI Estufa (37ºC) 24h BHI Ágar Estoque NaCl Diluição Para a Determinação da Atividade Antimicrobiana in vitro, cada amostra foi inoculada em caldo nutritivo BHI e colocada em Overnight. Logo após, uma alíquota do crescimento foi diluída em NaCl, assim, foi feita a técnica de INUNDAÇÃO em placas de HIA, removido o excesso de líquido e colocado na estufa para secagem por 20 minutos. Inundação Remoção do excesso e secagem na Estufa (37ºC) por 20 mim

Medição dos Halos Formados Atividade Antimicrobiana in vitro DILUIÇÃO DO EXTRATO 1 2 3 4 5 2mL Ext. Puro 1mL H2O 6 7 8 9 10 Perfuração dos Poços 1 2 3 4 5 Durante esse intervalo, foi feita a diluição do extrato de M. tenuiflora Depois da secagem, as placas foram perfuradas, onde em cada poço foi colocado uma diluição do extrato. As placas foram colocadas na estufa a 37ºC por 24 horas, Após esse tempo, foi observada a formação de halos de inibição e medidos com o auxílio de um paquímetro. Medição dos Halos Formados Estufa (37ºC) 24h Formação dos Halos de Inibição 50цL da Diluição do Extrato em cada poço

Solidificação do meio em estufa a 37º C por 2 horas Níveis de Resistência Inoculação Meio de Cultura Diluição em Placa Diluição Extrato (%) 10% BHI (...) Estufa (37ºC) 24h Ágar Estoque (...) 1 2 17 (...) Diluição NaCl Multialça + 2mL Extrato 5% + 1mL H2O + 1mL Diluição (...) (...) 0,019% + Para a determinação dos níveis de resistência, todas as amostras foram inoculada em caldo nutritivo BHI e diluídas em NaCl. Neste experimento, foi utilizado um aparelho chamado multialça que inocula 17 amostras por vez. As placas foram preparadas com 18 ml do Meio (HIA) e 2 ml da diluição do extrato, foi esperada a solidificação do meio em estufa por 2 horas. Assim, as amostras foram inoculadas com a multialça e incubadas em estufa a 37º C por 24 horas, para posterior leitura dos resultados. Solidificação do meio em estufa a 37º C por 2 horas HIA (18mL) Estufa (37ºC) 24h

Cinética Bactericida (1h) (2h – 10h e 24 h) (2h – 10h e 24 h) BHI Ágar Estoque Estufa (37ºC) 24h Sub-cultivo (MHB) Estufa (37ºC) (2h – 10h e 24 h) Diluições (NaCl) 9ml MHB + 1 mL H2O CONTROLE Plaqueamento MHA Estufa (37ºC) TRATADO 9ml MHB + 1 mL extr. 10% Estufa (37ºC) TÍTULO (1h) Diluições (NaCl) Diluições (NaCl) MHA Plaqueamento (2h – 10h e 24 h) Plaqueamento MHA Estufa (37ºC) 24h Número de Colônias

Obrigada!!!! Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica