CENTRIFUGAÇÃO Graduação em Biotecnologia Disciplina de Técnicas Instrumentais Prof. Fabricio Rochedo Conceição fabricio.rochedo@ufpel.edu.br CENTRIFUGAÇÃO 08 de abril de 2011

CENTRIFUGAÇÃO * A centrifugação é um processo de separação em que a força centrífuga relativa gerada pela rotação da amostra é usada para sedimentar sólidos em líquidos, ou líquidos imiscíveis de diferentes densidades, separando-os * É usada em diferentes aplicações laboratoriais, industriais e domésticas

Princípio Físico A força centrífuga relativa (FCR) é gerada quando uma partícula ou conjunto de partículas é sujeito a um movimento circular A força centrífuga relativa é calculada da seguinte forma: FCR = 0.00001118 ×R ×N2 R= raio de centrifugação em centímetros (cm) N= velocidade de centrifugação em rotações por minuto (rpm) A unidade de medida da força centrífuga relativa é o "g", sendo 1g equivalente à aceleração da gravidade na superfície da terra

CENTRÍFUGAS São equipamentos que aplicam a força centrífuga relativa para separar as partículas de uma solução * Células * Vírus * Organelas * DNA, RNA e proteínas ...

CENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIAL CENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTE “Peletização” Sobrenadante + “pellet” (sedimento) CENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTE Separação de macromoléculas ou células recorrendo a gradiente de concentração da solução base usada para a separação das partículas

TIPOS DE CENTRÍFUGAS Bancada Clínica Microcentrífuga 17.000g 4.600g 2 – 180 mL 4.600g 0,2 – 75 mL 16.000g 0,2 – 2 mL

TIPOS DE CENTRÍFUGAS Alta velocidade Ultracentrífuga 15.000g 30 – 500 mL 800.000g 10 – 60 mL

ROTOR OSCILANTE ROTOR DE ÂNGULO FIXO Separa suavemente as células Mais demorado ROTOR DE ÂNGULO FIXO Concentração de amostras Mais rápido Pode danificar as células

COMO CENTRIFUGAR? 1- Escolha da centrífuga e dos tubos - Volume - Composição do tubo: Baixa FCR (plástico, vidro ...) Alta FCR (nitrocelulose, polialômero ...) - Composição da amostra: Aquosa (plástico, vidro) Orgânica (vidros e certos plásticos) 2- Equilibre os tubos *** - Os tubos colocados frente a frente devem ter o “mesmo peso” - Microcentrífuga: ajuste pelo volume e não pelo peso - Equilibrar juntamente com tampas e suportes (partes removíveis) - Preencha os tubos até 1 a 2 cm da borda 3- Confira o peso *** 4- Coloque os tubos sempre na mesma orientação *Aba do Eppendorf

COMO CENTRIFUGAR? 5- Sempre colocar a cobertura do rotor - As centrífugas geram aerossóis - Quebra do tubo 6- Ajustar os parâmetros de centrifugação - Velocidade (RPM x FCR) - Temperatura - Tempo 7- Sempre espere a centrífuga alcançar a velocidade máxima antes de se afastar 8- Após a centrifugação: “gentileza” para remover tubos

COMO CENTRIFUGAR? 9- Remova o sobrenadante 10- Limpe suportes e rotor - Decantação (inversão do tubo) “aerossóis” - Aspiração 10- Limpe suportes e rotor 11- Secar o interior da centrífuga 12- Folha de registros e de reserva - Vida útil do rotor “segurança” - Manutenção 13- Feche a tampa das centrífugas refrigeradas no intervalo de uso para evitar condensação