BIOLOGIA MOLECULAR NA GENÉTICA FORENSE ou Apesar do DNA, as Probabilidades de Sempre...

REPETIÇÃO IN TANDEN 3’-CGTAAATCTAGGTGTCGTCTACTAAAG-5’ 5’-GCATTTAGATCCACAGCAGATGATTTC-3’ 5’-GCATTTAGATCCACAGCAGCAGCAGCAGATGTTTC-3’ 3’-CGTAAATCTAGGTGTCGTCGTCGTCGTCTACAAAG-5’ MAIO 2004 O DNA e a LEI

A TÉCNICA DE PCR - CICLO I DNA dupla fita 5' 3' Região alvo •Desnaturação das fitas de DNA • Pareamento dos primers primers DNTPs Taq DNA pol. •Alongamento das novas fitas MAIO 2004 O DNA e a LEI

A TÉCNICA DE PCR - CICLO II Região alvo 5' 3' •Desnaturação das fitas de DNA • Pareamento dos primers •Alongamento das novas fitas MAIO 2004 O DNA e a LEI

STRS = SHORT TANDEM REPEATS 2 CAGATACCGCTCGCGCTCGACGACACAGCCAT 4 CAGATACCGCTCGCGCTCGACGACGACGACACAGCCAT 5 CAGATACCGCTCGCGCTCGACGACGACGACGACACAGCCAT 6 CAGATACCGCTCGCGCTCGACGACGACGACGACGACACAGCCAT 2/6 5/6 4/6 2/4 MAIO 2004 O DNA e a LEI

ELEMENTOS BÁSICOS MICRO- SATÉLITES (STRs) MAIO 2004 O DNA e a LEI

ELEMENTOS BÁSICOS MICRO- SATÉLITES (STRs) MAIO 2004 O DNA e a LEI

Nova aparência MAIO 2004 O DNA e a LEI

ELEMENTOS BÁSICOS LOCUS GENE ALELO Alelo paterno obrigatório inclusão exclusão 1/2 3/4 2/3 1/2 4/5 2/3 MAIO 2004 O DNA e a LEI

PV PROBABILIDADE DO TRIO SER VERDADEIRO 1/2 3/4 2/3 probabilidade de se encontrar um trio com os fenótipos observados e que o suposto pai é o pai biológico PV = P(M 1/2) • P(P 3/4) • P(F 2/3|M 1/2, P 3/4) PV = P(M) • P(P) • P(F | M,P) MAIO 2004 O DNA e a LEI

PF PROBABILIDADE DO TRIO SER FALSO 1/2 3/4 2/3 probabilidade de se encontrar um trio compatível, com os fenótipos observados e que o suposto pai não é o pai biológico. PF = P(M 1/2) • P(P 3/4) • P(F 2/3|M 1/2, P ) PF = P(M) • P(P) • P(F | M) MAIO 2004 O DNA e a LEI

IP ÍNDICE DE PATERNIDADE PV IP = PF Simplificando, IP se baseia em apenas duas probabilidades: (a) de que o casal M e P produza o filho (b) de que a M tenha o filho IP = P(M) • P(P) • P(F | M,P) P(M) • P(P) • P(F | M) P(F | M,P) P(F | M) = MAIO 2004 O DNA e a LEI

CÁLCULO DO IP 1/2 3/4 1/4 2/3 1/3 2/4 P(F | M,P) = 0,25 2/ 1/ Neste caso: IP = 0,25 / 0,5 p3 IP = 0,5 / p3 MAIO 2004 O DNA e a LEI

CÁLCULO DO ÍNDICE REGRA SIMPLES Mãe Filho APO 1/1 1/# #/# ∆ 1 ½ Ø p1 # 1/2 ½ p1 1,2 1/# ou 2/# MAIO 2004 O DNA e a LEI

Freqüência alélica e valores do índice 0,1 0,4 0,8 5 1,25 0,625 Quanto mais raro o alelo, maior o índice de paternidade 0,1  MAIO 2004 O DNA e a LEI

LAUDO EXCLUSÃO MAIO 2004 O DNA e a LEI

LAUDO INCLUSÃO MAIO 2004 O DNA e a LEI

ÍNDICE e PROBABILIDADE IP PP = IP+1 ÍNDICE PROB 100 1000 10.000 100.000 1.000.000 10.000.000 0,99 0,999 0,9999 0,99999 0,999999 0,9999999 99 % 99,9 % 99,99 % 99,999 % 99,9999 % 9999999 % MAIO 2004 O DNA e a LEI

CRITÉRIOS PARA INCLUSÃO Descontar o maior IP Não há número mínimo de exames Loci geneticamente não ligados Probabilidade mínima 99,99% IP > 10.000 MAIO 2004 O DNA e a LEI

ÍNDICES PARA EVIDÊNCIAS NÃO GENÉTICAS VASECTOMIA OUTRAS EVIDÊNCIAS TOTAL 1/8000 1/3000 1/24 000 000 MAIO 2004 O DNA e a LEI

ÍNDICE COMPOSTO ÍNDICE FINAL EXAMES LABORATÓRIO 1 OUTRAS EVIDÊNCIAS ÍNDICE COMPOSTO 1 EXAMES LABORATÓRIO 2 ÍNDICE FINAL 10000 1/24000000 1/2400 24000000 Observe-se que a ordem dos fatores não altera o produto ! MAIO 2004 O DNA e a LEI

CONCLUSÕES.1 quantificada na forma de índice. Qualquer evidência não genética Índice final Limite mínimo: CONCLUSÕES.1 quantificada na forma de índice.   Produto dos índices individuais. Probabilidade de 99,99% Índice: 10.000 para qualquer índice das evidências não genéticas, sempre haverá um conjunto de exames de dna tal que seu índice neutralizará qualquer índice atribuído às outras evidências. MAIO 2004 O DNA e a LEI

CONCLUSÕES.2 Se se aceita a idéia de que todas as evidências não genéticas sejam quantificáveis numericamente, e acreditamos que sejam, para qualquer investigação de paternidade pode ser obtida resposta definitiva exclusivamente pelo DNA. MAIO 2004 O DNA e a LEI

IMPLICAÇÕES E COMENTÁRIOS

ÍNDICES PARA EVIDÊNCIAS NÃO GENÉTICAS VASECTOMIA OUTRAS EVIDÊNCIAS TOTAL 1/8000 1/3000 1/24 000 000 MAIO 2004 O DNA e a LEI

(sobras de necrópsia, exames, etc) DESAFIOS ÉTICOS Denúncia materna oitiva de testemunhas material hospitalar (sobras de necrópsia, exames, etc) Amostras de exames anteriores A recusa de se submeter aos exames Suficiente? Desnecessária?! pertencem à família? O Juiz pode determinar seu uso? Podem ser usadas à revelia da família? Prova de ‘culpa’ do acusado. MAIO 2004 O DNA e a LEI

FONTES DE DNA e alguns problemas Sangue periférico Esfregaço celulas mucosa oral Líquido Seminal Ossos Fios de cabelo GRANDE PROBLEMA: Troca de amostras Transfusão NÃO afeta exame ESTOCAGEM: Glicerol ou em Papel assinado ÉTICA: Autorizações Materna e Paterna MAIO 2004 O DNA e a LEI

PERÍCIA INDIRETA - INFERÊNCIA DE UM GENÓTIPO PELO EXAME DE FAMILIARES 1 / 2 2 / 4 1/2 1/4 2/2 2/4 1 / 2 Se 3 no lugar de 4 e p(3)=0,1 IP = 0,5 x 0,5 / 0,1 = 2.5 2 / 3 MAIO 2004 O DNA e a LEI

QUESTÕES FREQÜENTES Exumação vs Exame dos familiares Material degradado (fragmentos muito pequenos); Pequena quantidade; Contaminação por DNA estranho (principalmente de fungos, bactérias e larvas de insetos, mas também dos colhedores das amostras). Exame dos Familiares: Número de locos + número de familiares – Quanto mais, melhor. Identificação Humana – O DNA mitocondrial MAIO 2004 O DNA e a LEI

OUTRAS QUESTÕES FREQÜENTES Freqüências alélicas brasileiras EXISTEM Os exames clássicos: O que não exclui, inclui ! Eram razoavelmente poderosos Nem todos devem ser revistos – só baixas probabilidades de exclusão Probabilidade a priori – 50% A Probabilidade de Paternidade não é uma probabilidade... MAIO 2004 O DNA e a LEI

TIPOS DE EXAME LABORATORIAL Sondas Multilocais unilocais STRs por PCR Alto custo. Grande quantidade de DNA. Treinamento; falta de repetiblidade. Não permitem cálculo preciso. Subjetiva ! Alto custo. Grande Quantidade de DNA. Excesso de alelos impede classificação precisa. Procedimento de escolha. MAIO 2004 O DNA e a LEI

MICROSSATÉLITES DETECTADOS POR PCR TAXA DE MUTAÇÃO SUPRESSÃO ALÉLICA REFERENCIAL NOMENCLATURA Soluções: TRÊS EXCLUSÕES EXCLUSÕES DIRETAS AMOSTRAS CLONADAS e SEQÜENCIADAS NOMENCLATURA - falso problema MAIO 2004 O DNA e a LEI