“DETECÇÃO MOLECULAR DO HPV EM PACIENTES ENCAMINHADAS À URS – SAGRADA FAMÍLIA - PBH” Vanessa Carla de Moraes Gonçalves Cirino Orientadora: Profa. Annamaria Ravara Vago PAD – Departamento de Morfologia - ICB – UFMG Laboratório de Biologia das Interações Celulares

INCIDÊNCIA DO CÂNCER DO COLO DO ÚTERO 15% DE TODAS AS CATEGORIAS DE CÂNCER FEMININO 2O TIPO DE NEOPLASIA MAIS COMUM ENTRE AS MULHERES MAIOR INCIDÊNCIA ENTRE MULHERES DE 40 A 60 ANOS 40.000 NOVOS CASOS SÃO DIAGNOSTICADOS A CADA ANO

Estimativas para o ano 2005 das taxas brutas de incidência por 100.000 e de número de casos novos por câncer, em mulheres, segundo localização primária. Localização Primária Neoplasia maligna Estimativa dos Casos Novos Minas Gerais Belo Horizonte Casos Taxa Bruta Pele não Melanoma 5.440 55,96 840 66,43 Mama Feminina 4.220 43,46 850 66,99 Traquéia, Brônquio e Pulmão 770 7,95 130 10,41 Estômago 800 8,24 160 12,93 Colo do Útero 1.580 16,27 300 23,28 Cólon e Reto 1.110 11,45 270 21,25 Esôfago 350 3,61 40 3,47 Leucemias 410 4,19 80 6,09 Cavidade Oral 330 3,38 60 4,86 Pele Melanoma 210 2,21 4,67 Outras Localizações 7.010 72,12 1.490 117,32 Total 22.230 228,75 4.280 337,39

HISTOLOGIA Connective Tissue Stratified Squamous Epithelium

INCIDÊNCIA DAS NEOPLASIAS

NEOPLASIAS INTRAEPITELIAIS CERVICAIS

COILOCITOSE

Nova Classificação Bethesda System. NIC I » lesão escamosa intra-epitelial de baixo grau (LSIL) NIC II, III e carcinoma in situ » lesão escamosa intra-epitelial de alto grau (HSIL) Células escamosas atípicas de significado indeterminado » ASCUS Células glandulares atípicas de significado indeterminado » AGUS

FATORES DE RISCO Infecção por HPV Paridade elevada Início precoce da vida sexual ativa Multiplicidade de parceiros sexuais Tabagismo Uso de contraceptivo oral Casos de imunossupressão Baixo nível socioeconômico

VIAS DE TRANSMISSÃO Sexual Neonatal Através de pinças, luvas, roupas, equipamentos, etc.

VÍRUS DO PAPILOMA HUMANO (HPV) baixo risco : 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, 53- 55, 57, 59, 66 e 68; médio e alto risco: 5, 8, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59; 1, 2, 5 e 8 Câncer de pele 16, 18, 31 e 45 Câncer de mucosas

O GENOMA DO HPV Dupla Hélice de DNA circular, 8000 pb, 3 segmentos: “Early-region” (E) – E1, E2, E4, E5, E6, E7 “Late-region” (L) – L1 e L2 “Long control region” (LCR)

CLÍNICO - LABORATORIAIS MÉTODOS DE DETECÇÃO CLÍNICO - LABORATORIAIS Citopatológico Colposcópico Histopatológico

MÉTODOS DE DETECÇÃO MOLECULARES Captura Híbrida Hibridização com sondas PCR – Reação em Cadeia da Polimerase

OBJETIVO URS – Sagrada Família. Realizar a extração do DNA e detecção de um fragmento do genoma viral amplificado por PCR das amostras cervicais coletadas de pacientes na URS – Sagrada Família.

METODOLOGIA

POPULAÇÃO ESTUDADA

DESENHO EXPERIMENTAL PCR n = 82 Proteinase K Fenol: Clorofórmio: IAA PACIENTES ENCAMINHADAS n = 82 COLETA DE AMOSTRAS ECTO E ENDOCERVICAIS Proteinase K Fenol: Clorofórmio: IAA EXTRAÇÃO DE DNA PCR ELETROFORESE GEL DE POLIACRILAMIDA COLORAÇÃO Ag+

MECANISMO DO PCR

PCR – fragmento de 450 pb do genoma viral ( Região de L1) Primers : MY09 e MY11 Programa de 40 ciclos

PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTO DE 450 pb DO GENOMA DO HPV

PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTO DE 110 pb DO GENE DE β–GLOBINA HUMANO

RESULTADOS 82 Extração de DNA 60 PCR – HPV 40 PCR – β-Globina 6 Amostras coletadas 82 Extração de DNA 60 PCR – HPV 40 PCR – β-Globina 6

RESULTADOS AMOSTRAS PCR - HPV PCR – β-Globina 1 - 2 + 3 4 5 6

OBJETIVOS FUTUROS Realizar a comparação entre os achados clínico-colposcópicos, citológicos, histopatológicos e moleculares obtidos nas amostras analisadas. Realizar a detecção dos subtipos de HPV.

BIBLIOGRAFIA Ministério da Saúde/ Instituto Nacional do Câncer, 1996, Viva Mulher. Programa Nacional do Câncer do Colo Uterino – Manual Informativo, RJ. Villa, L. , Caballero, O. L. , Levi, J. E. , Pena, S. D. J. , Simpson A. J. G. An approach to Human Papillomavirus indentification using low stringency single specific primer PCR. Franco, E. L. The sexually transmitted disease model for cervical cancer: incoherent epidemiologic findings and the role of misclassification of human papillomavirus infection. Epidemiology, v.2, p.98 – 106, 1991.

AGRADECIMENTOS Professora Annamaria Ravara Vago Equipe do Serviço de Patologia da URS – Sagrada Família (Médicos, Enfermeiros e Auxiliares de Enfermagem). Pacientes participantes deste Projeto de Pesquisa Professora Cleida A. Oliveira Lucas Henrique, Sandra Moraes (Mãe) e Altair Cirino (Pai) Amigos do Laboratório ( Alan, Soraya, Daniela, Alexandre e Carla)