Watson e Crick
A=T C=G
Desnaturação de DNA % desnaturação T’m Temperatura oC
Ligação cooperativa quando rompida o efeito é marcante.
Desnaturação de DNA % desnaturação T’m Temperatura oC
Desnaturação em função do conteúdo de GC %CG T’m
Separando as fitas! Aumento de Temperatura ou de pH resulta em desnaturação
Reassociando Temperatura e força iônica
Reassociação
Reassociação depende da concentração das seqüências Cot
A velocidade de reassociação depende da complexidade do DNA Cot
Três classes de seqüências de DNA % reassociação Cot
O segredo da Vida...
Como copia...
Replicação de DNA
Ligação fosfodiester A reação de polimerização é feita pela DNA polimerase e necessita de nucleotídeos trifosfatos, uma extremidade “primer” ou iniciadora, que possui a hidroxila 3’ livre e um molde ou “template” para ser copiado.
A=T C=G ¿G=T? ¿C=A?
DNA polimerase I tem função editorial
“Bolha” de replicação
Como as seqüências são reconhecidas?
Domínio: Dedo de Zinco
Domínio: Hélice-Volta-Hélice homodímeros podem reconhecer a seqüência Seqüências simétricas!
Replicação unidirecional gera fragmentos: Fragmentos de Okazaki
Replicação depende de diferentes atividades enzimáticas!
Maquinaria de Replicação é um complexo multienzimático!
Topoisomerases são realmente necessárias? Tipo I Tipo II
Qual a velocidade de replicação? Em bactérias : 2000 bases/segundo Em eucariotos: 50 bases/segundo
Como fica o final do Cromossomo?
Empacotamento do DNA
Organização da cromatina
Seqüenciamento de DNA Princípios
Reação com ddNTP
Produtos da reação
Leitura da seqüência