Adaptada da Universidade de Rochester, 2005 Introdução Lipossomas Elásticos – Transporte Transdérmico Com essas propriedades, os lipossomas elásticos são adequados para administração transdérmica de bioativos porque podem penetrar em camadas mais profundas da pele mantendo a sua integridade. Representação esquemática do movimento dos lipossomas elásticos atravessando a epiderme Adaptada da Universidade de Rochester, 2005 3

Homogeneização de Tamanhos (SUV’s) Metodologias Preparação e Caracterização Lipossomas Convencionais e Elásticos Método de Bangham Homogeneização de Tamanhos (SUV’s) Caracterização dos Lipossomas Convencionais: Teor de Fosfato –Método Espectrofotométrico Diâmetro e Distribuição de Tamanhos – Espectroscopia de Correlação de Fótons - PCS Morfologia – Microscopia Eletrônica de Transmissão Fosfatidilcolina de ovo, 60,8% de fosfatidilcolina - 1.10-3mol.L-1 Solvente: Clorofórmio (Merck) Hidratação: Tampão HEPES (Sigma) Tensoativo: Polioxietilenoglicol-8-lauril (PEG-8L), (Lipochemicals) Caracterização dos Lipossomas Elásticos: Incorporação de Tensoativos – Tensão Superficial Diâmetro e Distribuição de Tamanhos – Espectroscopia de Correlação de Fótons - PCS Morfologia – Microscopia Eletrônica de Transmissão

Homogeneização de tamanhos (Sonicador Vibra Cell) Metodologias Incorporação de um fármaco nos Lipossomas Hidratação do filme seco C = 1.10-4mol.L-1 Homogeneização de tamanhos (Sonicador Vibra Cell) Incubação com 25% e 40% de PEG-8L Neste trabalho, cafeína extraída de sementes de guaraná foi incorporada nos lipossomas elásticos para avaliar a influencia de sua incorporação. Por fim, cafeína foi incorporada nos lipossomas convencionais, na etapa de hidratação do filme seco de lipídios, e posteriormente foi feita a homogeneização de tamanhos em Sonicador Vibra cell, e finalmente incubação com 25% e 40% de PEG-8L. Dizer que é para estudar a influência na elasticidade Lipossomas Elásticos Contendo o fármaco 5

P (atm) = 2,5; 12 (Pressao ótima para extrusao) Metodologias Transporte em Membranas de Nanoporos Lipossomas Convencionais, Elásticos e PEG-8L Transição de Formas: Diâmetro e Distribuição de Tamanhos Morfologia Tensão Superficial Teor de Fosfato Reologia em Membranas de Nanoporos: Curvas de Vazão versus Queda de Pressão Após a caracterização, os lipossomas convencionais e elásticos foram permeados em duas membranas sobrepostas de policarbonato, com diâmetro de poros de 30 nm, e em pele animal, na temperatura de 37oC, correspondente a temperatura corpórea. A Transição de Formas após a permeação foi avaliada em termos de..... E a reologia em termos de.... Este ensaio é um ensaio dito limpo, porque se consegue realizar as caracterizações, p.e. teor de fosfato. As permeações de PEG-8L foram feitas para melhor entender o comportamento deste, quando puro em solução, para que posteriormente, após a incorporação e permeação dos lipossomas elásticos, se possa entender sua reologia e transição de formas. P (atm) = 2,5; 12 (Pressao ótima para extrusao) 6

Metodologias Transporte em Membranas de Nanoporos Solução de Cafeína Pura Lipossomas Elásticos Incorporados com Cafeína Transição de Formas: Diâmetro e Distribuição de Tamanhos Teor de Fosfato Reologia das Dispersões em Membranas de Nanoporos: Curvas de Vazão versus Queda de Pressão O transporte em membranas de nanoporos para a solução de cafeína pura e para os lipossomas incorporados com cafeína, foi feito nas pressões de 2,5; 12 e20 atm. 7

Metodologias Caracterização em termos de tamanho Luz não espalhada O transporte em membranas de nanoporos para a solução de cafeína pura e para os lipossomas incorporados com cafeína, foi feito nas pressões de 2,5; 12 e20 atm. Média Ângulo de Espalhamento Detector 8

Intensidade de Luz Espalhada Resultados Lipossomas Convencionais Rendimento em Relação ao Teor de Fosfato – 100% Diâmetro e Distribuição de Tamanhos I (%) 5 24 7 9 1 2 N (%) Os lipossomas convencionais apresentaram rendimento de 100% na preparação para uma concentração inicial de 1.10-3mol.L-1. No caso da análise de diâmetros deste trabalho, é imprescindível a informação tanto da presença de toda a faixa de tamanhos identificada pela distribuição em intensidade, quanto dos tamanhos analisados em termos de número de vesículas. No tempo zero, após o repouso da amostra e acomodação da agregação dos lipídios, as vesículas apresentaram distribuição de tamanhos semelhantes, tanto para intensidade quanto para numero, e diâmetro médio em torno de 104 nm. Nos tempos de 1 até 9 horas, em termos de intensidade, a faixa de distribuição apresentou-se mais larga, com partículas mantendo a faixa de diâmetros de 40 a 200 nm e diâmetro médio 106 nm, estreitando-se no tempo de 24 horas, com diâmetro de 109 nm. Em termos de número, no tempo de 1 até 9 horas, a maior parte das partículas tem diâmetro de 60 nm, sendo no tempo de 24 horas correspondente a 105 nm. Diâmetro (nm) Diâmetro (nm) Intensidade de Luz Espalhada Número de Partículas 9

Resultados Lipossomas Convencionais Morfologia As imagens mostram concordância com a análise PCS. A presença de vários agregados nas imagens provavelmente são decorrentes da secagem da amostra. As partículas mais escuras em relevo são os lipossomas, enquanto que os agregados mais claros são decorrentes do sal da solução tampão utilizado na preparação dos lipossomas. Observou-se nos vários campos que as vesículas não são perfeitamente esféricas apresentando também formas elipsoidais alongadas, provavelmente devido à fluidez da membana lipídica dos lipossomas de lecitina de ovo, que à temperatura ambiente apresentam-se na fase de líquido cristalino. As bordas espessas é uma característica desse tipo de imagem, que aparecem na micrografia podem ser resultantes da fusão ou da presença de mais de uma lamela nos lipossomas maiores. 10

Resultados Lipossomas Elásticos Morfologia Solução pura de PEG-8L 0,4.10-3 mol.L-1 Pode-se observar que solução de PEG-8L livre apresenta agregados no seio da solução, em uma faixa ampla de distribuição de tamanhos, com predominância dos agregados menores. Comparadas às micrografias dos lipossomas convencionais, observou-se que esses agregados não apresentaram bordas tão bem definidas. Para os lipossomas elásticos com 40% de PEG-8L, observou-se que a bicamada lipídica fica completamente envolvida pelo tensoativo. Lipossomas elásticos (40% de PEG-8L) 11

Resultados Transição de Formas Morfologia dos Lipossomas Elásticos com 40% de PEG-8L após o Escoamento em Membranas de Nanoporos na Pressão de 2,5 atm e 370C Imediatamente após o Escoamento Imediatamente após a permeação, observou-se presença de vesículas elásticas grandes e pequenas, assim como estruturas alongadas. Verificou-se também uma diminuição do halo de tensoativo presente ao redor dos lipossomas indicando que, ao ser comprimido dentro do poro, houve uma reestruturação do arranjo tensoativo-fosfolipídio. No tempo de 24 horas após a permeação, observa-se a presença de partículas bem menores, esse comportamento pode ser devido a desestruturação e formação de partículas menores. Lipossomas Elásticos antes do Escoamento 12