Molecular markers closely linked to fusarium resistance genes in chickpea show siginificant alignments to pathogenes-related genes located on arabidopsis chromosomes 1 and 5 Theoretical Applied Genetics 2003 Benko-Iseppon, A.M.; Winter, P.; Huettel, B.; Staginnus, C.; Kahl, G.
Luiz Nali Isaac Farias Ferreira Neto Marcadores moleculares ligados a genes de resistência a fusarium em grão-de-bico mostram alinhamentos significativos a genes relacionado à patogênese localizados em cromossomos 1 e 5 de arabidopsis Luiz Nali Isaac Farias Ferreira Neto
Resumo Alinhamento significativo (cromossomo 1 e 5 de Arabidopsis) Populações resistentes e suscetíveis (F7-F8) SCAR Seleção de primers (DAF +BSA) Busca de Homologia Excisão Clonagem Seqüenciamento Produto amplificado BLAST-X
Introdução Importância econômica Distribuição geográfica do Grão-de-bico Fatores limitantes de produção Situação atual do melhoramento e perspectivas
Objetivo Mapeamento genético direcionado a regiões de resistência a fusarium em populações de grão-de-bico através de análise de bulks segregantes
Material e Métodos ICC-4978 (parental resistente) X Cicer reticulatum PI489777 (parental suscetível) 131 plantas de populações F7-F8 (RILs) Extração e quantificação de DNA
Análise de bulks segregantes (BSA)
Amplificação de DNA DAF SCAR Volume da reação 15 µL 50 µL Tampão 10x MgCl2 2,5 mM 1,5 mM dNTP-mix 10 mM 200 mM Taq polimerase 0,4 U 0,5 U Primers 40 pmol 250 pmol Temp. de anelamento 35 ºC 62-65 ºC DNA 15 ng 12 ng 35 ºC 95 ºC
Análise de ligações
Isolamento e clonagem Qiaquick Kit Vetor pGEM -T E. Coli DH10-B, DH5-α ou SURE Eletroporação Seleção de plasmídeos
Seqüenciamento dos fragmentos
Análise das seqüências (BLAST-X e BLAST-N)
(Grupo de ligação 2 do Foc-4 e foc-5) Resultados 2ª Etapa 174 primers Parentais 7RI 7SI 24 primers 19 primers selecionados (Grupo de ligação 2 do Foc-4 e foc-5) 1ª Etapa (12 indivíduos) 432 primers BSA + DAF BR Bs 174 primers polimórficos
Primers selecionados
BLAST-X de seqüências clonadas
Mapa de ligação (Mapmaker)
Primers SCAR derivados de marcadores DAF a partir do PRIMER 3
Conclusões Os marcadores produzidos aumentaram a densidade de marcas nos flancos do gene de resistência Foc-4; O fragmento oriundo do primer OP-P15-3 obteve similaridade à proteína N-hidroxicinamol/benzotransferase (regulador de fitoalexina) encontrado no cromossomo 5 na A. thaliana; Encontrou-se no fragmento do primer OP-P15-3 uma pequena seqüência com função similar a uma proteína de resistência (semelhante a um retrotransposon) presente em A. thaliana e Tabacum as quais são ricas em seqüências de leucina; O fragmento oriundo do primer OP-M20-3 possui similaridade ao gene de reparo MutS2 existente no cromossomo 5 da A. thaliana;
Alguns marcadores moleculares presentes no mesmo grupo de ligação do gene de resistência ao Fusarium, apresentaram alinhamentos significativos a genes relacionados a patogenicidade localizados nos cromossomos 1 e 5 da A. thaliana; Por outro lado, não foi possível localizar nenhum marcador suficientemente próximo aos loci de resistência (Foc-4 e Foc-5) para permitir uma clonagem baseado no mapa.
Etapas futuras Está sendo gerado uma biblioteca de BAC para mapeamento físico com utilização de SCARs, onde irá permitir a clonagem dos genes de resistência.
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