Fagocitose De Células Apoptóticas Por Macrófagos Humanos

Apresentação em tema: "Fagocitose De Células Apoptóticas Por Macrófagos Humanos"— Transcrição da apresentação:

1 Fagocitose De Células Apoptóticas Por Macrófagos Humanos
Análise Por Citometria De Fluxo

2 Células apoptóticas são fagocitadas pelos macrófagos humanos?

3 Materiais Populações de Marcadores: Macrófagos Neutrófilos
Células apoptóticas Marcadores: CMFDA (5-cloromethylfluorescein diacetate) CD 14 CD 15 CD 16 CD 62

4 Métodos Citometria de Fluxo Microscopia Fluorescência

5 Problemas Lavagem dos macrófagos – perda de células
Dificuldade na discriminação de células interiorizadas e periféricas Quantificação microscópica demorada e pode conter erros significativos

6 Métodos Amostra em fases – Percoll
Sangue periférico Células mononucleares Células polimorfonucleares Separar os polimorfonucleares (95% neutrófilos) Ressuspender Centrifugar Incubar

7 Métodos Neutrófilos são marcados com CMFDA
Macrófagos incubados com neutrófilos Promove-se a fagocitose Análise por citometria

8 Resultados – CMFDA CMFDA marca os neutrófilos sem afectar o processo de apoptose. Não altera a velocidade da fagocitose Não interfere na superfície da célula Não altera a viabilidade dos macrófagos

9 Resultados – Fluorescência
Duas populações distintas de neutrófilos Uniformidade da marcação Intensidade da fluorescência

10 Resultados – Fagocitose
R1 analisado por fotomicroscopia 96% macrófagos fagocitaram. R2 e R3 percentagem reduzida (3%)

11 Resultados – Taxa Fagocítica
Variações da taxa de fagocitose com estímulos exteriores

12 Resultados – Resposta Fagocítica
Resposta fagocítica máxima demorada Subestimada

13 Resultados – Lavagens Perda de células
Diminuição da capacidade fagocítica Subestimada

14 Discussão Apoptose e remoção das células apoptóticas é fundamental
A quantidade de ensaios aumenta a hipótese de erros

15 Discussão A citometria de fluxo é um importante mecanismo:
Na distinção das células interiorizadas, das periféricas, Remoção do erro do observador, Elevado número de amostras, Não necessita de lavagens.

16 Ciência Viva Sara Jorge Julho 2010