Tecnologia do DNA recombinante

Apresentação em tema: "Tecnologia do DNA recombinante"— Transcrição da apresentação:

1 Tecnologia do DNA recombinante

2 A deficiência de hormônio do crescimento faz com que a pessoa fique com uma estatura baixa. Nesses casos, é necessário o uso hormônio do crescimento para que o crescimento dessas crianças melhore. O hormônio do crescimento foi um dos primeiros produtos da engenharia genética. Ele foi produzido em E. coli a partir de um gene humano fusionado com elementos reguladores bacterianos. Esse foi o segundo produto farmacêutico aprovado pelo FDA, em 1985. O primeiro foi a insulina humana, em 1982.

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4 Como amplificar um gene de interesse

5 Tipo de DNA doador DNA genômico cDNA – DNA complementar

6 cDNA – contém apenas os éxons

7 DNA de interesse Formação de uma molécula de DNA recombinante vetor

8 Enzimas de Restrição

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12 Como funciona a amplificação

13 VETORES Plasmídeos: são moléculas de DNA circulares, extracromossômicas, presentes em microrganismos, sendo que muitos se replicam autonomamente.

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15 Estrutura de dois plasmídeos

16 Vetores de bacteriófagos
A maioria  fago labda Genoma do fago: pb 15kb são necessários para a lisogenia e podem ser removidos.

17 Clonagem usando o fago como vetor

18 Vetores cosmidiais É um híbrido entre plasmídeos e o fago labda
Vantagens: capacidade do plasmídeo de replicação autônoma Capacidade do fago de embalagem do cromossomo Capacidade de 35 a 45kb

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20 Estrutura de um cromossomo artificial bacteriano (BAC) usado para clonar grandes fragmentos de DNA (150 a 300kb)

21 Construção de bibliotecas de DNA
Conjunto de clones de DNA, contendo coletivamente todo o genoma. DNA total  digestão com enzimas de restrição  inserção em vetores

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24 Uma boa biblioteca tem todas as sequencias de DNA do genoma.
Para genomas grandes são necessários milhares de clones O número de clones pode ser calculado: N=(ln(1-P)/(ln(1-f) P: probabilidade, f: fração do genoma em um clone de tamanho médio

25 Exemplo Drosophila  genoma 100.000kb Inserto  40kb
Probabilidade de 99% de certeza de uma seqüência estar na biblioteca: N=(ln(1-0,99)/(ln(1-(40/100000) N= clones

26 Exercício O genoma humano tem 3 bilhões de nucletídeos
Utilizando BACs: insertos de 200kb Quantos clones são necessários para ter uma certeza de 95% de ter uma seqüência específica na biblioteca? N=44.979

27 Microsatélites

28 Teste de paternidade

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