Determinação de teor de substâncias

Apresentação em tema: "Determinação de teor de substâncias"— Transcrição da apresentação:

1 Determinação de teor de substâncias
(ensaios de potência ou doseamento) Espectrofotômetro UV – VIS HPLC / CLAE

2 Ensaios de Potência ou Doseamento
Finalidade: Quantificação da concentração de substância ativa em medicamentos Garantir que as Matérias -Primas atendam as especificações e que o produto final tenha qualidade adequada Análises Qualitativas + Análise Quantitativas Observação: Dependendo do fármaco ou forma farmacêutica, podem existir diferentes métodos válidos oficiais ou não. Com relação aos métodos oficiais, existem diferenças quanto as metodologias, as quais estão atreladas a realidade econômica de cada país.

3 Ensaios de Potência ou Doseamento,
Multinacionais Farmacêuticas: adotam métodos Cromatográficos como oficiais de Doseamento, especialmente de produtos acabados. USP: HPLC/UV é o mais indicado pela grande maioria das monografias. Outras farmacopéias: São mais diversificadas. Exemplos: volumetria, titulações, espectrometria no UV, entre outros.

4 Ensaios de Potência ou Doseamento,
Escolha do Método analítico: deve ser criteriosa, uma vez que não pode haver falhas. A segurança e eficácia do medicamento depende da confiabilidade do resultado fornecido Aspectos considerados na seleção de um método: Tempo de análise Custo Precisão Exatidão

5 Ensaios de Potência ou Doseamento,
Métodos analíticos: Divide-se em dois grandes grupos Métodos clássicos: baseados em reações químicas,cujo equilíbrio deve ser bem definido. São apontados até hoje como métodos oficiais para doseamento, descrito em compêndios farmacopéicos. Ponto de viragem: mudança de cor, ppt, turbidez, sendo possível visualização a olho nú. b) Métodos instrumentais: Instrumentos apropriados Vantagens em relação ao método clássico: rapidez e utilização de amostras com concentrações pequenas do constituinte a ser determinado.

6 Ensaios de Potência ou Doseamento
a) Métodos clássicos: - Análise gravimétrica - Análise volumétrica (Titrimétrica ou Titulométrica) Vantagens: baixo custo, simplicidade e relativa precisão b) Métodos instrumentais: - Destacam-se pela maior sensibilidade - Podem ser utilizadas microgramas de amostra. Principais métodos: Espectroscopia de absorção UV / Vis e IV HPLC/ UV Espectroscopia de fluorescência,cromatografia gasosa,entre outros.

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Métodos Espectroscópicos ( Espectrométricos) Espectrometria de Absorção UV /Vis Utilizada para determinação quantitativa de substâncias Baseado na interação entre matéria e energia eletromagnética A solução quando irradiada pode absorver esta energia/onda eletromagnética.

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Lei de Lambert – Beer A absorvância (A): é diretamente proporcional a concentração da espécie absorvente quando se fixa o comprimento do percurso e diretamente proporcional quando se fixa a concentração. A: a.b.c a: Absotividade/ absorvância (característica do composto) b: espessura da amostra (cubeta) c: concentração Válida nas seguintes condições: a radiação incidente é monocromática A absorção ocorre numa seção universal uniforme.

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Cálculos de Concentração: Com valor da absortividade: Usar lei de Lambert-Beer e realizar cálculo para determinação da concentração (c) A: a.b.c A: Absorvância ( determinado pelo especrofotômetro) a: Absotividade/ absorvância (característica de cada composto) b: espessura da amostra (cubeta) c: concentração

10 Ensaios de Potência ou Doseamento
b) Com valor de absortividade (a) desconhecido: fazer curva padrão ( mínimo 4 concentrações diferentes ). Obs.: Importante verificar a linearidade da resposta Curva de calibração ou Curva analítica: Construção da curva de calibração: mede-se de 4 a 5 soluções padrão com concentrações diferentes no comprimento de onda escolhido para determinação da absorvância. - Plotam-se as absorbâncias nas ordenadas (eixo Y) e as concentrações das soluções nas abscissas (eixo X) - Se o composto obedecer a lei de Lambert-Beer consegue-se uma reta de calibração que passa pela origem.

11 Curva de calibração - Espectrofotometria de absorção, obtida com as soluções padrão
Y= bx - a Equação da reta de calibração: R: varia de 0 a 1 ( quanto mais prox de 1, mais ajustados estão os pontos na reta.

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Lembrando que : Solução Padrão: Apresenta concentração exata de uma substância que servirá como referência na determinação da concentração de uma outra substância Cálculo da concentração da amostra analisada ( que é desconhecida): através da equação da reta de calibração Y = Absorvância da amostra analisada a= constante de linearidade dados pelo b= coeficiente angular da reta gráfico X= concentração da amostra a ser determinada Y= bx - a

13  Leitura complementar: Teste de Uniformidade de Doses unitárias
A uniformidade das doses unitárias de formas farmacêuticas pode ser determinada por dois métodos: Variação de peso Uniformidade de conteúdo. O método de variação de peso pode ser aplicado se o produto contiver 50mg ou mais de um componente ativo, compreendendo 50% ou mais em peso, da dose unitária da forma farmacêutica. A uniformidade de qualquer outro fármaco ou componente ativo, se presente em quantidade menor é avaliada pela Uniformidade de conteúdo (Doseamento por espectrofotômetro, Titulação e dependendo da substância testes em HPLC).

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Exercicio : A RDC 67, de 08/10/2007, no item Controle de Qualidade dos Medicamentos Manipulados, diz que: “A farmácia pode manipular e manter estoque mínimo de preparações oficinais (...), desde que garanta a qualidade das preparações”. Desta forma, a Farmácia Joãozinho produz cápsulas de minoxidil de 5mg. Seu teor é determinado por espectrofotometria no ultravioleta, utilizando a curva de calibração abaixo, cujo coeficiente de correlação determinado foi r=0, Após uma cápsula ser diluída em balão volumétrico de 100,0ml, deste foi retirada uma alíquota de 3,0ml para balão volumétrico de 10,0ml e, deste último, foi realizada a leitura no espectrofotômetro, obtendo-se 0,602 de absorbância. Responda às perguntas a seguir, considerando a forma farmacêutica, sua dosagem e a Resolução em vigor.

15 a) Qual a principal análise requerida para esta cápsula? Por quê?
b) O coeficiente de correlação obtido está apropriado para a utilização da curva? Explique. c) Qual a concentração determinada de minoxidil presente em uma cápsula?

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Respostas : A principal análise é a determinação da uniformidade de conteúdo. Esta análise é indicada para substâncias de baixo índice terapêutico, uma vez que verifica o teor da substância ativa de 10 cápsulas individualmente. Sim, pois valores de R maiores que 0,99 indicam alta correlação (R: coeficiente de correlação.Quanto mais próximo de 1,0 melhor ajustados os pontos na reta) c) Cálculo da concentração: Equação da reta : Y : bx – a Y: 0,0500x – 0,103 , onde Y : 0,602 ( absorvância da amostra) X: 0,602 +0,103/ 0, X: 14,1 μg /mL x fator de diluição ( 14,1 x 1000/3) X: 4,7 mg /cápsula

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HPLC por UV/ Vis Quando são realizadas análises por CLAE, obtem-se no final da análise gráficos com picos que representam a passagem do analito pelo detector em determinado instante da análise. - Cada pico pode ter sua área calculada, como mostrado abaixo. Área do triângulo isósceles que “engloba” o pico cromatográfico.

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O pico (área do pico) pode ser relacionado com a concentração da substância, desde que seja construída uma curva analítica com soluções padrão. Curva de calibração: Utilizam-se concentrações de solução padrão para construção da curva. As áreas (ou alturas) dos picos são plotados nos gráficos no eixo das ordenadas ( eixo Y) e as concentrações no eixo das abscissas (eixo X).

19 Curva de calibração – HPLC / UV
Concentração x Área Equação da reta Y= bx - a Área A3 Ax A2 A1 C2 Cx C3 C1 Concentração

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Cálculo da concentração da amostra analisada: Utiliza-se a equação da reta da curva de calibração determinada. Y= bx - a Y = Área do pico da amostra analisada (dado pelo equipamento) a= constante de linearidade dados pelo b= coeficiente angular da reta gráfico X= concentração da amostra a ser determinada

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Observação : Cromatografia em Camada Delgada Apesar de não ser a grande característica da CCD, ela tbém pode nos fornecer um resultado Quantitativo. Compara-se a área da amostra com a área do padrão OU Desgastar a área da mancha do composto para depois extrai-lo e determiná-lo por métodos químicos ou físicos tradicionais ( método bastante trabalhoso) Ex.: espectrofotômetro.