TESTE DE SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS (TSA) OU ANTIBIOGRAMA Thiago C. Nascimento

Conceito: Teste para verificar o comportamento dos microrganismos (sensibilidade ou resistência) “in vitro”, frente a diversos antimicrobianos, para a escolha do antimicrobiano ideal. Indicações: Para microrganismos isolados e identificados como agentes causadores de infecção; Quando o microrganismo causador da infecção apresenta, estatisticamente, grande variabilidade no espectro de resistência ou tendência à mesma. Ex: Staphylococcus aureus, Pseudomonas sp.

Dispensado: Para microrganismos cuja sensibilidade não apresenta variação ao longo do tempo. Ex: Neisseria meningitidis, Streptococcus pyogenes (sensíveis à penicilina G) Os resultados servem de base para: Nortear a escolha do agente antimicrobiano mais adequado; Predizer a chance de sucesso de um esquema terapêutico.

Cultura + Antibiograma O diagnóstico laboratorial das doenças infecciosas começa com a indicação clínica adequada do exame microbiológico, o que requer conhecimento da epidemiologia e da fisiopatologia do processo infeccioso Cultura + Antibiograma

Rede Brasileira de Monitoramento da Resistência Microbiana (ANVISA) Laboratórios brasileiros CLSI

Tipos de Teste: 1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar 2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Diluição: em tubo ou em placa; Teste E (Teste epsilométrico).

1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (Kirby-Bauer) 16 a 24h, 35 º C Suspensão bacteriana (0,5 McFarland ) Á gar Mueller - Hinton Disposi ç ão dos discos impregnados com antimicrobianos Princípio: medida do halo de inibição (mm)

1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (Kirby-Bauer)

Caldo + droga em concentrações crescentes 2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Inoculo padronizado da amostra teste Aerobiose ~24 H - 37ºC Caldo Ágar Caldo + droga em concentrações crescentes Controle CIM Diluição: em tubo; 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0,0625µg/mL -1024,0 µg/mL

Concentração Inibitória Mínima 2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Diluição: em placa; Aerobiose 24h - 35ºC Suspensão bacteriana (0,5 McFarland) Controle Concentração Inibitória Mínima Replicador de Steers Ágar + Droga

? 0,0 µg/mL 0,0625 µg/mL 0,125µg/mL 0,25µg/mL 0,5µg/mL 1,0µg/mL

2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM). B. Teste E (Teste epsilométrico).

2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM). B. Teste E (Teste epsilométrico). Vários estudos demonstram que a CIM determinada pelo Etest® apresenta concordância com os métodos de diluição em ágar ou tubo, para dierentes antimicrobianos, em geral, com uma variação permitida de +/- 1 diluição.

2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória mínima (CIM). B. Teste E (Teste epsilométrico).

DEMONSTRAÇÃO E INTERPRETAÇÃO

2. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (Kirby-Bauer) Halo de leitura em mm Ausência de halo: resistência Presença de halo: sensibilidade ou resistência Leitura

Medir os halos de cada placa distribuída 2. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (Kirby-Bauer) Medir os halos de cada placa distribuída Anotar os resultados Consultar o CLSI Resultado Sensível Resistente Resistência Intermediária

Correlação entre tamanho do halo e CIM Quando os halos de inibição são correlacionados aos valores logarítmicos da CIM, pela análise de regressão linear, encontra-se uma relação linear consistente demonstrando que o halo de inibição é inversamente proporcional à CIM daquele antimicrobiano

Do ponto de vista clínico, o que significa dizer que uma bactéria é sensível, resistente, ou apresenta resistência intermediária? Resistente: significa que a bactéria não é inibida pelas concentrações de antimicrobiano alcançadas pelas doses habituais e há grande chance de falha terapêutica; a bactéria cresce na concentração sérica máxima do antimcrobiano no paciente; Resistência intermediária: isolados cujas CIMs são próximas à concentração sérica máxima obtida por aquele antimicrobiano; Sensível: a categoria sensível implica que a infecção causada pela bactéria isolada pode ser adequadamente tratada com a dosagem recomendada para aquele tipo de infecção e para aquela espécie bacteriana, portanto o antimicrobiano pode ser utilizado para o tratamento;

Os resultados dos TSA devem ser muito bem interpretados pela equipe do laboratório de microbiologia, antes que o relatório final seja emitido ao médico.

Fatores que influenciam o resultado do TSA: 1. Composição química do meio de cultura: ágar Muller-Hinton, com 4 a 6 mm de espessura ; 2. Densidade do inóculo: 108 células/mL; 3. Temperatura: 35ºC a 37ºC; 4. Concentração dos antimicrobianos nos discos; 5. Validade e conservação dos discos; 6. Ação e estabilidade da droga: 7. Tempo de incubação : 18 a 24h 6.1 . Algumas drogas podem sofrer hidrólise nas primeiras horas de incubação 6.2 . Velocidade de crescimento maior que velocidade de difusão da droga

Antimicrobianos de escolha x Antimicrobianos de reserva de espectro estreito x de amplo espectro Antimicrobianos de escolha x Antimicrobianos de reserva

Triste Realidade

Obrigado