Provas de Coombs Prof. Dr. Luiz Carlos de Mattos

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1 Provas de Coombs Prof. Dr. Luiz Carlos de Mattos
Laboratório de Imunogenética Molecular Hemocentro de São José do Rio Preto Departamento de Biologia Molecular Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto

2 Y Y Y Antiglobulina humana (soro de Coombs) Antiglobulina humana
soro humano Antiglobulina humana Anti-IgG, anti-IgM, anti-IgA Anti-C3b, anti-C3c, anti-C3d

3 Soro de Coombs Soros poli-específicos:
anti-IgG, anti-IgM, anti-IgA, anti-C3b, anti-C3c, anti-C3d. Soros mono-específicos: anti-IgG anti-IgM anti-IgA anti-C3b Anti-C3c anti-C3d

4 Prova direta da antiglobulina
Coombs direto: Princípio: Detecção de eritrócitos sensibilizados “in vivo” por anticorpos ou por frações do complemento. Aplicações: Doença hemolítica perinatal Anemias hemolíticas auto-imunes Anemias hemolíticas induzidas por drogas Reações hemolíticas pós-transfusionais

5 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Prova direta da antiglobulina
Coombs direto positivo Y Y Y Y Y Y Y Y Centrifugação Y Y Y Eritrócitos sensibilizados “in vivo” Eritrócitos aglutinados Coombs direto negativo Y Y Centrifugação Y Eritrócitos não sensibilizados “in vivo” Eritrócitos não aglutinados

6 Prova indireta da antiglobulina
Coombs indireto: Princípio: Detecção de anticorpos anti-eritrocitários através da sensibilização de hemácias “in vitro”. Aplicações: Pesquisa de anticorpos irregulares no soro de pacientes poli-transfundidos, gestantes, doadores, etc... Identificação das especificidades de anticorpos irregulares em painel de hemácias Investigação das reações hemolíticas pós-transfusionais Identificação de antígenos eritrocitários (fenotipagem)

7 Y Y Y Y Y Y Prova indireta da antiglobulina + +
Primeira fase: sensibilização dos eritrócitos “in vitro” Y Y Y + Y Incubação Y Y Hemácias I e II Soro com anticorpos irregulares Eritrócitos sensibilizados “in vitro” + Incubação Hemácias I e II Eritrócitos não sensibilizados “in vitro” Soro sem anticorpos irregulares

8 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Prova indireta da antiglobulina
Segunda fase: detecção dos eritrócitos sensibilizados. Coombs indireto positivo Y Y Y Y Y Y Y Centrifugação Y Y Y Y Eritrócitos sensibilizados “in vitro” Eritrócitos sensibilizados “in vitro” aglutinados Coombs indireto negativo Y Y Centrifugação Y Eritrócitos não sensibilizados “in vitro” Eritrócitos não sensibilizados “in vitro” não aglutinados

9 Prova indireta da antiglobulina
A prova de Coombs indireta pode ser realizada: Em meio salino Em meio albuminoso Em solução de baixa força iônica Com hemácias tratadas com enzimas (bromelina, papaína, ficina Com uso de poli-etileno-glicol (PEG) Em tubos Em micro-placas Em gel-card Em fase sólida Automatizadas

10 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Controle de Coombs
Reações de Coombs com resultados negativos. Y Y Y Y Y Eritrócitos não aglutinados Hemácias sensibilizadas (controle de Coombs) Y Y Y Centrifugação Y Y Y Y Eritrócitos não aglutinados Hemácias sensibilizadas aglutinadas