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Tecnologia do DNA Recombinante Tecnologia do DNA recombinante Enzimas de Restrição (endonucleases): tesouras do DNA enzimas produzidas por bactérias para.

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Apresentação em tema: "Tecnologia do DNA Recombinante Tecnologia do DNA recombinante Enzimas de Restrição (endonucleases): tesouras do DNA enzimas produzidas por bactérias para."— Transcrição da apresentação:

1 Tecnologia do DNA Recombinante Tecnologia do DNA recombinante Enzimas de Restrição (endonucleases): tesouras do DNA enzimas produzidas por bactérias para restringir a proliferação de vírus invasores; diferentes tipos de enzimas clivam diferentes sequências de bases de DNA; reconhecem e clivam o DNA em pontos específicos, geralmente em sequências de 4, 6 e 8 bases – palíndromas. Nomenclatura: as enzimas de restrição são chamadas de acordo com a bactéria que a produziu: Izosquizomeros Izosquizomeros: diferentes enzimas de restrição que possuem a mesma sequência de reconhecimento

2 Tecnologia do DNA recombinante Extremidades: coesivas X cegas coesiva = EcoRI = cega = SmaI = 5-CCCGGG-3 3-GGGCCC-5 5-CCC GGG-3 3-GGG CCC-5 -3

3 Tecnologia do DNA recombinante Cortando e Juntando o DNA....

4 Tecnologia do DNA recombinante Amplificação do DNA recombinante....

5 Tecnologia do DNA recombinante Escolha de um vetor de clonagem: molécula pequena – fácil manipulação capaz de se replicar em uma célula viva presença de sítios de restrição para inserção do DNA a ser clonado possuir um método de identificaçãoe recuperação das moléculas recombinantes Ex: pUC18 ampR - bactérias transformadas serão resistêntes a ampicilina popiligador – sítio de clonagem múltipla lacZ - codifica para –galactosidade que converte X-Gal em um corante azul

6 Tecnologia do DNA recombinante Construção de uma biblioteca de DNA Construção de uma biblioteca de cDNA cDNA = DNA complementar; feito a partir do mRNA; não tem introns

7 Uso do DNA clonado como sonda transferência de Southern (E.M. Southern) - DNA transferência de Northern- RNA transferência de Western - PTN Tecnologia do DNA recombinante

8 Mapas de Restrição As unidades do mapa são expressadas em pares de bases ou para distâncias mais longas em pares de kilobases É uma compilação do número, da ordem e da distância entre locais do corte da enzima de restrição ao longo de um segmento de DNA O DNA encontra-se, geralmente, dentro de um vetor bem caracterizado do plasmídeo ou do bacteriófago, onde a sequência é conhecida Normalmente, o mapeamento é a primeira etapa para caracterizar um DNA desconhecido e um pré-requisito para manipulá-lo para outras finalidades.


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