Aplicação e comparação de diferentes metodologias de extração na determinação das atividades antimicrobianas e antioxidantes de extratos vegetais da Campomanesia.

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1 Aplicação e comparação de diferentes metodologias de extração na determinação das atividades antimicrobianas e antioxidantes de extratos vegetais da Campomanesia sessiliflora O. Berg. Mestrando: Felipe Francisco Bittencourt Junior

2 Graduado em Biomedicina pelo Centro Universitário da Grande Dourados (2010).
Mestrando em Recursos naturais pela Universidade Estadual do Mato Grosso do Sul (Mar/2012-Mar/2014). Linha de pesquisa: Bioprospecção. Orientador: Prof. Dr. Euclésio Simionatto (UEMS). Co-orientador: Prof. Dr. Marcus Vinícius Pimenta Rodrigues (UNOESTE).

3 Bioprospecção: “Método de localizar, avaliar e explorar sistemática e legalmente a diversidade de vida existente em determinado local. Tem como objetivo principal a busca de recursos genéticos e bioquímicos para fins comerciais”. (FARNSWORTH, N. 1997)

4 Aplicações Genética: Manipulação gênica.
Bioprodutos: hormônios vegetais. Química: biodiesel. Cosmetologia: Descoberta e manipulação de novas substâncias em prol da estética. Bioquímica: princípios ativos. Farmacologia/microbiologia: síntese de novos fármacos/tratamentos. “Cerca de 25% dos medicamentos existentes foram elaborados com ingredientes ativos extraídos de plantas”. REID et al (1993)

5 Principais métodos de extração de substâncias:
Infusão Maceração Destilação Uso de solventes

6 Propriedades comumente exploradas:
Antimicrobianos Antioxidantes Antinflamatórios Hipoglicemiantes Herbicidas: Curatella americana L. (Lixeira) “O extrato diclorometanólico da folha da lixeira apresentou um elevado potencial fitotóxico, em concentrações semelhantes às utilizadas pelos herbicidas comerciais. (BARBOSA, Cecília.Soares et al.)

7 Campomanesia sessiliflora
Popularmente conhecida como Guavira,Guabiroba. Nativa do Brasil. Pouco exigente em relação ao solo/clima. Consumida popularmente “in natura”, em sorvetes ou na cachaça.

8 Propriedades conhecidas
Adstringente Antidiarréica Frutos Hipoglicemiante Relaxante muscular Antinflamatório Folhas Analgésico

9 Objetivos Comparar a eficiência de extração dos solventes empregados.
Avaliar a atividade antioxidante e antimicrobiana dos extratos das folhas de Campomanesia sessiliflora O. Berg. Fornecer base para futuras pesquisas.

10 Avaliação da atividade antimicrobiana (UNIGRAN)
Avaliação da atividade antioxidante (Unidade de Naviraí) Bioautografia

11 Metodologia Solventes empregados: Hexano: (apolar)
Acetato de etila: (apolar) Clorofórmio: (apolar) Metanol: (polar)

12 Metodologia

13 Preparação dos extratos

14 Evaporador rotativo

15 Método de difusão em ágar
Teste Qualitativo Reativação das bactérias. Semeadura e padronização (escala 0,5 mac Farland). Cobertura da superfície do ágar com solução bacteriana padrão. Perfuração do ágar e inoculação do extrato (concentrações de 200ug/mL e 100ug/mL). Incubação em estufa (24h). Leitura dos resultados e comparação com antibióticos padrão (gentamicina e ampicilina) e tabela.

16 Concentração Inibitória Mínima
Teste Quantitativo Concentrações de extrato 100 ug/mL 50ug/mL 25ug/mL 12,5ug/mL 6,25ug/mL 3,12ug/mL 1,56ug/mL 0,75ug/mL ... Bactérias utilizadas: Escherichia coli Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pyogenes Proteus mirabilis Enterococcus faecalis

17 Determinação da MIC

18 Testes antioxidantes Baseados na espectrofotometria
Diferença de absorbância Solução teste – solução padrão (controle)

19 Bioautografia Indica o grupo de substâncias com atividade antimicrobiana presentes no extrato. Borifar substância com cultura bacteriana em placa cromatografada. Incubar por 24h. Corar com eosina. Leitura do cromatograma. A inibição é indicada por clareamento

20 Resultados já obtidos Extrato hexânico: Extrato de acetato de etila:
Não ocorreu atividade inibitória Atividade inibitória perante: S. aureus: 35 mm P. aeruginosa: 37 mm E. faecalis: 32 mm P. mirabilis: 40 mm OBS* Relativos à concentração de 200ug/mL

21 Resultados Inibição do crescimento de Staphylococcus aureus após o mesmo ser confrontado com o extrato de acetato de etila da Campomanesia sessiliflora O. Berg.

22 Referências LIMA MRF, XIMENES CPA, LUNA JS, SANT’ANA AEG 2006a. The antibiotic activity of some Brazilian medicinal plants. Rev Bras Farmacogn 16: MOKBEL, M.S.; HASHINAGA, F. Evaluation of the antioxidant activity of extracts from buntan (Citrus grandis Osbeck) fruit tissues. Food Chemistry, v. 94, n. 4, p , 2006. BARRY AL, THORNSBERRY C Susceptibility tests: Diffusion Test Procedures. In: BALOWS A, HAUSER WJ, HERMANN KL, ISENBERG HD, SHAMODY HJ Manual of clinical microbiology. 5.ed. Washington, DC:American Society for Microbiology, p BAUER, A.W.; KIRBY, W.M.; SHERRIS, J.C; TURCK, M. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. American Journal Clinical Pathology, v. 45, p. , 1966. CAVIN, A.; HOSTETTMANN, K.; DYATMYKO, W.; POTTERAT, O. Antioxidant and Lipophilic Constituints of Tinospora crispa . v. 64, p , 1998. WATERMAN, P.G., MOLE, S. Analysis of phenolic plant metabolites. Oxford: Blackwell Scientific, p. 238, 1994. MOKBEL, M.S.; HASHINAGA, F. Evaluation of the antioxidant activity of extracts from buntan (Citrus grandis Osbeck) fruit tissues. Food Chemistry, v. 94, n. 4, p , 2006

23 Agradecimentos