PCR Polymerase Chain Reaction

Apresentação em tema: "PCR Polymerase Chain Reaction"— Transcrição da apresentação:

1 PCR Polymerase Chain Reaction
Amplificação in vitro de uma seqüência específica de DNA * replicação in vitro

2 História Kary Mullis (1983) Prêmio Nobel Química (1993)
Revolucionou genética pesquisa genética medicina forense genética molecular

3 Componentes da reação DNA molde Oligonucleotídeos (primer) dNTP’s
DNA Polimerase Magnésio Tampão Água

4 Temperatura Ótima: 72 graus
Thermus aquaticus -Estável a temperaturas de 177 graus; Temperatura Ótima: 72 graus

5 Thomas D. Brock no lago do “Yellowstone National Park”
de onde foi isolado o Thermus aquaticus

6 Equipamento TERMOCICLADOR

7 PCR PCR se constitui hoje no método de rotina para isolar rapidamente sequências específicas a partir de uma mistura complexa de seqüências genômicas ou de cDNAs.

8 PCR CICLOS Programa 35 ciclos 94 0C por 5 min 94 0C por 1 min

9 O ciclo da PCR

10 Análise dos resultados
ETAPAS Extração de DNA Desenho dos Primers Reação de PCR Análise dos resultados

11 EXTRAÇÃO DO DNA

12 DELINEAMENTO DE PRIMERS
Os iniciadores (oligos / primers) são a chave do sucesso ou da falha de um experimento com PCR. -Tamanho dos primers; - Estabelecimento das temperaturas corretas a serem utilizadas;

13 ETAPAS DA PCR

14 ETAPAS DA PCR DESNATURAÇÃO ANELAMENTO POLIMERIZAÇÃO

15

16

17 Eletroforese

18 Eletroforese em gel de agarose

19 Visualização do DNA em luz ultravioleta

20 ANIMAÇÃO