A apresentação está carregando. Por favor, espere

A apresentação está carregando. Por favor, espere

Extração e purificação dos antígenos imunodominantes de Corynebacterium pseudotuberculosis Revisão bibliográfica Os antígenos Extração Purificação Material.

Apresentações semelhantes


Apresentação em tema: "Extração e purificação dos antígenos imunodominantes de Corynebacterium pseudotuberculosis Revisão bibliográfica Os antígenos Extração Purificação Material."— Transcrição da apresentação:

1 Extração e purificação dos antígenos imunodominantes de Corynebacterium pseudotuberculosis Revisão bibliográfica Os antígenos Extração Purificação Material e método Extração Purificação

2 Membrana Parede Ag. Extra celulares Ag. Intra celulares? Ag. fracamente ligados à parede Ag. de parede / membrana Representação esquemática da localização das frações antigênicas de C. pseudotuberculosis Peptidoglicano Ácidos teicóicos Camada lipídica

3

4

5

6

7 As frações antigénicas de Corynebacterium pseudotuberculosis Antígenos extracelulares Antígenos fracamente ligados à parede Antígenos celulares (parede/membrana, intracelulares)

8 Extração dos antígenos de C. pseudotuberculosis

9 Purificação dos antígenos de C. pseudotuberculosis

10

11 S-Layer (1)

12 Extracelulares (4)

13 Celulares (3)

14 Esquema de vacinação : (3 coelhos por extrato) Injeção inicial SC: 0,5 mg de proteína com adjuvante de Freund completo, Boosts a cada 30 dias, 0,25 mg, SC (Freund incompleto) ou IV (Ag sem adjuvante) Sangria 15 dias após cada boost. Obtenção de soro para imunodifusão e Cromatografia de imunoafinidade (E. Harlow and D. Lane, 1988, Weare et al, 1982) C. Imunoafinidade Reversa Frações obtidas a partir de PAGE NÃO DESNATURANTE Imunodifusão Frações antigénicas extraídas (4) Preparação do soro: Aquecimento 56ºC, 30 min. Precipitação com (NH 4 ) 2 SO 4 ou Cromatografia Exclusão Resuspensão em NaHCO 3 (CIAR) Desalinização (Diálise ou Sephadex G-25) (ID)

15

16 Celulares (3)Extracelulares (4) PAGE não desnaturante Bandas contaminantes Sóro anti Contaminantes Gel de Sepharose 6MB ativado com Brometo de cyanógeno + Cromatografia de Imunoafinidade Reversa

17 Extração por detergentes/Sonicado E. Celulares (3) Controle de qualidade Lowry PAGE / Imunoblot Outros Extratos E. Intracelulares (2) E. Extracelulares (4) E. S-Layer (1) Soro ID (4) EXTRAÇÃO Lowry Soro ID PAGE / Imunoblot Extratos 1 e 2 Extratos 3 e 4 C. Exclusão C. I. A. R. PURIFICAÇÃO


Carregar ppt "Extração e purificação dos antígenos imunodominantes de Corynebacterium pseudotuberculosis Revisão bibliográfica Os antígenos Extração Purificação Material."

Apresentações semelhantes


Anúncios Google