Avaliação dos efeitos genotóxicos da exposição ocupacional a pesticidas sobre agentes sanitários da Fundação Nacional de Saúde do Estado de Minas Gerais.

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1 Avaliação dos efeitos genotóxicos da exposição ocupacional a pesticidas sobre agentes sanitários da Fundação Nacional de Saúde do Estado de Minas Gerais Fernanda de Souza Gomes Kehdy Orientadora: Profª Maria Cristina Lima de Castro Co-orientadora: Profª Cleusa Graça da Fonseca

2 Introdução Pesticidas Seletividade dos pesticidas
Risco tóxico para humanos

3 Introdução Tipos de intoxicações: Aguda Sub-crônica Crônica

4 Biomonitoramento genotoxicológico
Introdução Potencial genotóxico CARCINOGÊNESE Biomonitoramento genotoxicológico

5 Introdução Biomarcadores: - análise de aberrações cromossômicas;
- análise de troca entre cromátides irmãs; - frequência de micronúcleos;

6 Introdução Micronúcleos: Efeito aneugênico

7 Introdução Micronúcleos: Efeito clastogênico

8 Introdução agentes clastogênicos agentes aneugênicos
Micronúcleos agentes aneugênicos - Teste de genotoxicidade in vitro; - Biomarcador p/ efeito de exposição a genotóxicos; (Norppa et al.,2003)

9 Introdução Vantagens do teste do micronúcleo: - Mais simples;
- Treinamentos mais curtos; - Mais rápido; - Requer menos custo; - Maior poder estatístico;

10 Introdução Fator de risco p/ câncer p53; Inibição do ciclo celular p53
Danos ao DNA p53 Reparo do DNA Ativação oncogenes Apoptose

11 Introdução p53: - Gene TP53; - Cromossomo17p13.1; - 393 aminoácidos;
Pro72 p53 Polimorfismo Apoptose Arg72

12 Introdução Estado de Minas Gerais:
~ 3000 agentes sanitários vinculados à FUNASA – aplicam pesticidas para o controle de vetores de doenças (180 reg. metropolitana) Sexo masculino Idade: 30 a 50 anos Pesticidas: piretróides e organofosforados Não foi feita análise dos efeitos genotóxicos dos pesticidas sobre estes trabalhadores;

13 Piretróides, organofosforados
Introdução N ° indiv. (exp/cont) Exposição Duração (anos) Biomarcador Resultado Referência 50/47 Piretróides, DDT 1-25 CA Pos (Ruppa et al.,1989) 26/26 Piretróides, organofosforados 2-18 (Ruppa et al.,1991) 48/50 4-50 SCE Neg (Pasquini et al.,1996) 22/16 7 MN (Venegas et al.,1998) 71/75 2-55 (Bolognesi et al.,1998)

14 Introdução Falta de concordância entre os resultados:
- diferentes condições de exposição (magnitude, uso de equipamentos de proteção); - nº de pesticidas utilizados; - combinação de pesticidas; - tempo e frequência de exposição; - características do indivíduo (idade, sexo, hábito de fumar e ingerir bebidas alcoólicas, estado nutricional); (Bolognesi, 2003)

15 Objetivo geral Avaliar os efeitos genotóxicos da exposição ocupacional a pesticidas em agentes sanitários vinculados à FUNASA, através do biomonitoramento genotoxicológico destes indivíduos, utilizando como biomarcador a frequência de micronúcleos em cultura de linfócitos isolados e estabelecer o genótipo do gene TP53 em relação ao polimorfismo do códon 72 para fins prognósticos.

16 Objetivos específicos
Delineamento das amostras; Padronização das condições de cultura de linfócitos isolados; Produção de lâminas; Determinação da frequência de MN; Verificação, através de testes estatísticos, de relação entre a frequência de MN e exposição a pesticidas; Amplificação, través de PCR, de fragmento do TP53 para detecção do genótipo em relação ao códon 72;

17 Metodologia Grupos amostrais:
Grupo experimental: 30 agentes sanitários vinculados a FUNASA, do sexo masculino, idade entre 30 e 50 anos, ocupacionalmente expostos a pesticidas; Grupo controle: 30 indivíduos do sexo masculino, idade entre 30 e 50 anos, sem história de exposição a pesticidas; 2) Entrevista. (idade, hábitos e exposição)

18 3) Teste do MN Metodologia

19 Substâncias a serem acrescentadas na cultura
Metodologia Tempo de cultura (h) Substâncias a serem acrescentadas na cultura PHA 24 48 Ct-B 72 96 Colher células (Adaptado de Fenech,2000)

20 Metodologia Célula binucleada

21 Metodologia Características do Micronúcleo:
Morfologia idêntica a dos núcleos principais; Diâmetro entre 1/16 e 1/3 dos núcleos principais; Mesma coloração dos núcleos; Não apresentar refringências; Não estar conectado a um dos núcleos; Não estar sobreposto a nenhum dos núcleos; (Fenech, 2000)

22 Metodologia Parâmetros a serem considerados:
- Frequência de MN/1000 cél. binucleadas; - Frequência de células binucleadas micronucleadas/1000 cél. binucleadas; - Distribuição de cél. binucleadas com 0, 1, 2, 3 ou mais MN; (Fenech, 2000)

23 Célula binucleada apresentando 1 MN
Metodologia Célula binucleada apresentando 1 MN

24 Célula binucleada apresentando 2 MN
Metodologia Célula binucleada apresentando 2 MN

25 Metodologia Células binucleadas apresentando 3 MN

26 Células binucleadas apresentando mais de 3 MN
Metodologia Células binucleadas apresentando mais de 3 MN

27 Metodologia 4) Análises estatísticas: frequência de MNs idade
hábito de fumar ingestão de bebidas alcoólicas exposição a pesticidas (tempo e frequência) Teste do qui-quadrado

28 Metodologia 5) Amplificação do TP53:

29 Metodologia Primers Sequência Tamanho do produto p53+/p53Arg-
p53+: 5’TCCCCCTTGCCGTCCCAA p53Arg-: 5’ CTGGTGCAGGGGCCACGC Alelo Arg 141 pb p53Pro+/p53- p53Pro+: 5’GCCAGAGGCTGCTCCCCC p53-: 5’CGTGCAAGTCACAGACTT Alelo Pro 177pb

30 Metodologia 6) Aspectos éticos: Consentimento livre e esclarecido;
Princípios éticos, aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFMG.

31 Obrigada!!!