Visão do microbiologista

Apresentação em tema: "Visão do microbiologista"— Transcrição da apresentação:

1 Estratégias de classificação e identificação de bactérias: clássicas, genéticas e moleculares

2 Visão do microbiologista
Suporte clínico e assesoramento Diagnose laboratorial da infecção Gestão do paciente Infecções novas ou resistentes Agentes antimicrobianos Tomada de decisões

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4 Isolamento de patógenos
Sangue – Bacteremia. Presença de bactérias no sangue. – Septicemia. Organismo virulento entrando de uma foco infeccioso para o sangue até outros tecidos causando novas infecções. – 10 ml ascepticamente em culturas aerobias/anaerobias - Pode estar contaminado com bactérias da pele como Staphylococcus epidermidis .

5 Culturas de urina Comuns em hospitais. Titulos de 105 organismos/ml
Avaliação microscópica Nitrito. Bacteria entérica nitrato-nitrito

6 Culturas fecais pH cai rapidamente, vial contendo tampão fosfato para transporte. pH ácido inibe crescimento de Shigella e Salmonella. Crescimento de amostras em vários meios

7 Feridas e abcesos Cotonete ou siringa depois de limpar a superficie com alcool 70%. Feridas purulentas: S aureus, bactérias entéricas, P. Aeruginosa, Bactérias anaeróbicas: Bacteroides e Clostridium. Transporte anaeróbico

8 Espécimens genitais Descarga da urétra purulenta: gonorrea
Transmitido por contato pessoal Resistente naturalmente a vancomicina, nistatina, colistina Gram negativa-gonococo

9 Métodos convencionais

10 Método convencional Depende da habilidade para cultivar
Treponema pallidum (sífilis, bactéria anaeróbica) Lento, especialmente para espécies fastidiosas Mycobacterium spp. Nem sempre definitivo

11 A maioria das amostras clínicas são crescidas primeiro em meio enriquecido de uso geral como agar sangue, que suporta crescimento da maioria dos organismos aerobios e anaerobios facultativos, gram + e gramm -. Meio de enriquecimento, Uso de meio seletivo e condições de incubação necessárias para isolar o microorganismo de amostras. É uma parte importante da microbiologia clínica.

12 -Ágar Sangue: meio utilizado para a maioria dos materiais clínicos
-Ágar Sangue: meio utilizado para a maioria dos materiais clínicos. Permite o crescimento de grande parte dos patógenos não fastidiosos ou que requerem incubação especial. Devido a adição de sangue de carneiro desfribinado proporciona a leitura das hemólises causadas pelo genêro Streptococcus spp.

13 O BD Hektoen Enteric Agar (agar entérico de Hektoen) é um meio para diferenciação moderadamente selectivo utilizado para o isolamento e diferenciação de microorganismos entéricos gram-negativos provenientes de amostras clínicas e não-clínicas. É um meio particularmente importante para o isolamento de espécies de Shigella e Salmonella.

14 Agar chocolate. Adição de sangue, mas só é adicionado qd a temperatura é de 80ºC (ocorre lise dos eritrócitos) microrg exigentes c/o o Género Neisseria. Tabela 24.1 mostra meios enriquecidos e meios seletivos para os isolamento de patógenos.

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16 Meio diferencial. São meios especializados que permitem a identificação de organismos baseado no seu crescimento e apariência no meio. Microbiologistas experientes podem fazer a tentativa de identificar um isolado clínico observando a cor e morfología das colonias do patógeno suspeito crescido em vários meios como descrito na tabela as described in Table 24.2.

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18 Métodos de identificação dependentes do crescimento
São métodos tradicionais para identificar patógenos observando as mudanças metabólicas induzidas pelo crescimentol. São rápidas e certeras.

19 Diagnóstico mudança de cor
Sistema desenhado para testes da familia Enterobacteriaceae

20 Table 24.3 gives important clinical diagnostic tests for bacteria.

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23 Susceptibilidade a antimicrobianos
Drogas antimicrobianas são usada amplamente Patógenos devem ser testados para a susceptibilidade a antibióticos individual para garantir a quimioterapia adequada. Esta abordagem rigorosa ao tratamento antimicrobiano é normalmente aplicada somente em ambientes de cuidados a saúde.

24 O procedimento padrão que avalia a atividade antimicrobiana é chamado de método de Kirby–Bauer (Figure 24.8).

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29 Antibiogramas são reportes periodicos para indicar a susceptibilidade de organismos isolados a antibioticos usados no local.

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31 Fitas com um gradiente de concentração de antibiótico

32 Segurança no laboratório de microbiologia.
Requer treinamento específico, planejamento e cuidado para prevenir infecção dos trabalhadores do laboratório com os patógenos. Materiais como culturas vivas, meios de cultura inoculados, usado agulhas hipodérmicas, e amostras de pacientes requerem precauções específicas para o manuseio seguro.

33 Métodos de Diagnóstico de Doenças Infecciosas Imunologia Clínica e Imunoensaios

34 A resposta imune é um resultado natural da infecção
A resposta imune é um resultado natural da infecção. Os principais aspectos da imunidade estão resumidos na Figura 24,10.

35 Respostas imunes específicas, em especial os títulos de anticorpos e testes cutâneos, podem ser monitorados para fornecer informações sobre infecções passadas, actuais infecções, e convalescença (Figura 24.11).

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37 Testes comuns de imunodiagnóstico de patógenos são apresentados na Tabela 24.5.

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39 Anticorpos monoclonais e policlonais
são usados para pesquisa e aplicações clínicas.

40 Table 24.6 shows characteristics of monoclonal and polyclonal antibody production.

41 Reações in vitro antígeno-anicorpo: Serologia
O estudo de reações antígeno-anticorpo in vitro são chamadas serologia.

42 Reações antígeno-anticorpo requerem que o anticorpo se ligue ao antígeno. Tipos de reações: Table 24.7.

43 Specifiidade (Table 24.8) and sensbilidade definem a precisão dos testes sorológicos individuais

44 Reações de Neutralização (Figure 24. 13) e precipitação (Figure 24
Reações de Neutralização (Figure 24.13) e precipitação (Figure 24.14) são alguns exemplos de testes de ligação de antígenos que produzem resultados visíveis envolvendo interações antígeno-anticorpo.

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46 Agglutination testes de aglutinação direta são amplamente utilizados para determinação dos tipos sanguíneos (Figura 24.15).

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48 Uma série de testes de aglutinação passiva estão disponíveis para a identificação de uma variedade de agentes patogênicos e produtos relacionados com o patógeno. Os testes de soroaglutinação são rápidos, relativamente sensíveis, altamente específicos, de simples execução e de baixo custo. Pérolas de latex-Proteína A liga Staphylococcus aureus Nisseria gonorrheae, haemophilus influenzae , C neoformans, C. albicans

49 Anticorpos Fluorescentes
anticorpos fluorescentes são usadas para a identificação rápida e precisa de patógenos e outras substâncias antigênicas de amostras de tecido e outros ambientes complexos. Ex. Bacillus anthracis- antrax pode ser usado para diagnóstico com microscópio fluorescente (esporos mandados por correio)

50 Fluorescent antibody-based methods (Figure 24
Fluorescent antibody-based methods (Figure 24.18) can be used for identification, quantitative enumeration, and sorting of a variety of cell types.

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52 Immunoblot Procedures
Immunoblot (Western blot) procedures (Figure 24.27) are used to detect antibodies to specific antigens or to detect the presence of the antigens themselves.

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58 1, soro controle positivo HIV
2, soro controle negativo (sadio) 3, soro paciente positivo forte 4, soro paciente positivo fraco 5, branco

59 Diagnóstico molecular

60 Nucleic acid hybridization is a powerful laboratory tool used to identify microorganisms (Figure 24.28).

61 Para criar uma sonda de ácido nucléico, uma determinada seqüência de ácido nucléico para o microorganismo de interesse deve estar disponível Talvez o uso mais difundido da tecnologia é baseado na aplicação de amplificação gênica (PCR). Vários métodos baseados em DNA são actualmente utilizados em clínicas, laboratórios de alimentos, e em pesquisa.

62 Table 24.9 lists pathogens identified with nucleic acid probe and PCR methods.

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64 Sequenciamento de rRNA
Maior avanço para classificar organismos Diferenças na sequencia de nucleotídeos é usada para classificar procariontes. 16S rRNA 23S rRNA Actually look at the DNA that codes for the rRNA

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66 How is this accomplished?
Extract DNA from a colony, or from an environmental sample without growing the organism. PCR with primers for rRNA sequences Automated DNA sequencer Coefficient of Similarity

67 Bacteria phylogenetic relationships based on rRNA sequences