Elisa.

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1 Elisa

2 Ensaio imunoenzimático que utiliza antígenos ou anticorpos marcados com enzimas, seguidos da adição de um substrato. Permite a detecção e quantificação de substâncias de interesse biológico. É um teste com alta sensibilidade, especificidade, é rápido, de baixo custo, e pode ser adaptado a diferentes graus de automação

3 Princípio Básico: Imobilização de um dos reagentes (Ag ou Ac) na fase sólida, enquanto o outro reagente (Ag ou Ac) esta ligado a uma enzima. Fase sólida: Poliacrilamida, agarose, poliestireno, etc. Geralmente são usadas placas de 96 poços, por permitirem a realização de múltiplos ensaios e automação.

4 Utilização O ELISA é utilizado para diagnóstico de parasitoses intestinais, tais como: Criptosporidiose Estrongiloidíase Esquistossomose Amebíase Teníase/Neurocisticercose Dentre outros.

5 ELISA Indireta – Etapas:
1a Etapa: Sensibilização da placa Ligação do Ag ou Ac à placa, através de interações hidrofóbicas. LAVAGEM 2a Etapa: Bloqueio O bloqueio é feito com uma solução com alta concentração de proteína inerte (leite desnatado, albumina bovina -BSA). Serve para evitar ligações inespecíficas.

6 3a Etapa: Adição da amostra
Soro LAVAGEM 4a Etapa: Adição do Conjugado Anticorpo marcado com enzima 5a Etapa: Adição do Substrato Cromógeno – Formação de uma cor 6ª Etapa: Adição da solução STOP

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8 Leitores de ELISA

9 Resultado de ELISA

10 Resultado de ELISA

11 Referêcias: FERREIRA, W. A.; ÁVILA, S. L. M.: Diagnóstico Laboratorial das principais doenças infecciosas e auto-imunes. 2ª Edição – Editora Guanabara Koogan, 2001; VAZ, A.J.; TAKEI, K.; BUENO, E.C.: Imunoensaios: Fundamentos e Aplicações. 1ª Edição – Editora Guanabara Koogan, 2007.