Unidade de Imunologia Molecular bssantos@fm.ul.pt Bruno Silva-Santos Daniel Correia Francisco d’Orey Miguel Ferreira Arlindo Ferreira Diogo Bruno Natacha Sousa Julie Ribot

Figure 3-11 Funções efectoras dos linfócitos T Eliminação de células infectadas/ transformadas e Produção de citocinas estimuladoras do SI

? Desenvolvimento de linfócitos T Timo Linfócito T Efector Célula TCR   Desenvolvimento de linfócitos T Linfócito T Efector Célula Progenitora (Medula Óssea) Timo TCRgd+ ?

Desenvolvimento de linfócitos T Curr Opin Immunol 17: 108-115 Pre-T Córtex tímico Pre-TCR gd LT LTbR Pro-T ab Progenitor (Medula Óssea) LT DP SP4 Medula tímica SP8

Regulação da resposta T Célula-alvo Doenças Inflamatórias e Autoimunes Perforina Granzimas TRAIL IFNs TNF IL-17 Linfócito T Regulador TGF-b, IL-10, CTLA-4 Linfócito T Effector

Sem condicionamento: Regulação Com condicionamento Com condicionamento Sem condicionamento Efectoras Reguladoras Nature 444: 1073-7

Novas populações reguladoras? TCRd–/– (sem linfócitos T gd) Controlo pele - fígado - intestino Identificação (marcadores moleculares e celulares); Testes in vitro (supressão de respostas efectoras); Testes in vivo (modelo animal de gastrite crónica).

Respostas anti-tumorais Protecção em modelos animais: Destruição in vitro (céls. Humanas): Linfomas Leucemias e Mielomas Melanomas Carcinomas (cólon, pâncreas) Carcinogénese química 5 10 15 Semanas após iniciação Tumores / ratinho *** 2 4 6 8 12 14 16 18 b–/–d–/– WT TCRd–/– ** * * p < 0.002 ** p < 0.001 *** p < 0.00001 Girardi et al. [2001] Science; [2003] J. Exp. Med. (DMBA + TPA, semanal) Protecção em modelos animais:

? ?? Reconhecimento das células tumorais? Célula tumoral + + MHC clássico Ligandos ?? co-receptores TCRgd + + Linfócito T gd

Modelo: linfomas e leucemias humanos 82% + linf T gd Daudi (Burkitt’s Lymphoma) 7% Oz (Pre-B cell Citólise in vitro: 9% Linha tumoral em cultura

Um novo candidato a antigénio tumoral: “Bruma” 16,0 14,0 12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 REH 697 OZ RCH HEL A549 ASM PBMC HL60 DAUDI AR230 RAMOS MOLT-4 TOM-1 RS4:11 KC112 BV173 THP-1 CACX DOHH2 HCTU6 INT407 Non-lymphoid

Tratamento com carcinogénio: Bruma é induzido durante a transformação Pele + 10 l TPA extracção queratinócitos 24 h Tratamento com carcinogénio: - TPA + TPA WT Ras Tg Ratinho IgC IgV Unique Tm -Actin Pele Pele +TPA -TPA Pap1 Pap2 Carc1 Carc2 Carc3 Tumores cutâneos Bruma

Planos futuros Comparações (microarrays) Interferência de RNA in vivo Expressão Localização Estrutura Interferência de RNA in vivo in vitro

Financiamento e Colaborações Desenvolvimento: Adrian Hayday (K. C. London) Daniel Pennington (Q. M. London) Benedita Rocha (I. Necker, Paris) Cancro: Luís Moita (IMM) João Barata (IMM) Sérgio Dias (IPO) Michael Girardi (Yale) Bernard de Bono (Cambridge) Inflamação: Luís Graça (IMM) Maria Mota (IMM) Jocelyne Demengeot (IGC) Elisabetta Padovan (IGC)