Identificação de Enterobactérias. Dra. Tânia Mara Ibelli Vaz Pesquisador Científico Instituto Adolfo Lutz - São Paulo

sair índice Família Enterobacteriaceae Patogenia Isolamento e identificação de enterobactérias Aspecto das colônias Identificação Bioquímica ( cultura pura) Reação de VM e VP Escherichia coli Salmonella Shigella Klebsiella Enterobacter Serratia Citrobacter Proteus - Providencia - Morganella Fluxograma BGN OXIDASE Considerações finais índice sair

Família Enterobacteriaceae sair índice Introdução Definição Bacilos Gram negativos AAF / Fermentadores da glicose Oxidase negativa e catalase + Móveis / imóveis Cresce em meios comuns Habitat Plantas, solo, água, intestino do homem e animais

Família Enterobacteriaceae sair índice Introdução Nomenclatura e Classificação Métodos Fenotípicos Moleculares  novas espécies reclassificação Classificação Gêneros ( 42) Espécies ( centenas ) biotipos e sorotipos  Complexos

índice sair Identificação de Enterobactérias Classificação - patogenia - Enteropatógenos - Infecções nosocomiais - espécies importantes - Outras espécies - raras em material clínico isoladas em : meio ambiente plantas animais

Família Enterobacteriaceae Patogenia sair índice Enterobactérias - principal componente da flora intestinal normal do homem. • Infecções -intestinal, feridas e trato urinário • Abcessos, pneumonia, meningites • Infecções nosocomiais

Família Enterobacteriaceae Patogenia sair índice Infecções intestinais Características normalmente na comunidade DTA – doença transmitida por alimento surtos / casos isolados hospitalar Patógenos entéricos clássicos Salmonella spp Shigella spp E.coli - categorias diarreiogênicas Yersinia enterocolitica

Família Enterobacteriaceae Patogenia sair índice Infecções extra-intestinais Comunidade Hospitalar Qualquer espécie Fatores de risco: Paciente Veículos de transmissão Alimentos contaminados Espécies mais comuns Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Proteus mirabilis Enterobacter spp Salmonella ( sorotipos) Serratia marcescens Citrobacter spp Providencia spp

Família Enterobacteriaceae sair índice ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN ( 18 a 24h  1 mm de diâmetro). 1- Exame macroscópico da cultura: Aspecto morfológico das colônias ( AS, MC,SS, TSA ) Tempo de crescimento e tamanho da colônia Observar pureza da cultura 2-Exame microscópico da cultura: Gram: tamanho, morfologia, reação tintorial, etc

Aspecto das colônias sair índice Agar MacConkey

Aspecto das colônias sair índice Salmonella. E.coli E.cloacae

Salmonella.

E. coli

E. cloacae Aspecto das colônias

Identificação Bioquímica ( cultura pura) Família Enterobacteriaceae sair índice Identificação Bioquímica ( cultura pura) Meios presuntivos IAL (Pessoa e Silva) EPM-MILI TSI IAL

Família Enterobacteriaceae sair índice Identificação Bioquímica Série completa - 47 testes Provas complementares: Fermentação de açúcares LDC- ODC - ADH CiSi Pesquisa de enzimas DNase gelatinase,lipase, NAR, ONPGase Gram Oxidase VM e VP

Família Enterobacteriaceae sair índice Reação de VM e VP Enterobactérias VP+ Enterobactérias VP - Enterobacter Klebsiella Serratia Maioria das espécies dos outros Gêneros Salmonella Shigella E.coli Proteus Morganella Providencia Citrobacter Kluyvera

K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+) Citrobacter amalonaticus e C. diversus Escherichia coli sair índice Diagnóstico Diferencial lac+ CISI - K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+) Citrato de Simmons Prova Citrobacter amalonaticus e C. diversus ( LDC-/motil.+CiSi+) Glicose+/Gás+/- sacarose+/- urease- *H2S- TDA- indol+ LDC+/- Motilidade+/- Marcadores Epidemiológicos Infec. Intestinais Sorotipagem Fatores de virulência Infec. Extra-intestinais Met. moleculares Aeromonas

índice sair Salmonella Diagnóstico diferencial Glicose+/gás v CiSi+ sac - H2S + urease- TDA - indol - LDC + Mov. + CiSi+ Lac - Citrobacter spp ( H2S + ) Proteus Prova de Fermentação glicerol Marcadores Sorotipagem Fagotipagem Moleculares

índice sair Shigella Diagnóstico diferencial E.coli ( LDC - / Mov.-) Glic.+ /gás - sac - urease - TDA - H2S indol v LDC - Mov. - CiSi - Lac - E.coli ( LDC - / Mov.-) Lactose Ci Christ. Acetato Trab. Citrato Sódio Marcadores Sorotipagem Met.moleculares

índice sair Klebsiella Diagnóstico diferencial Lac+ CiSi + Enterobacter ( LDC+ / Mov.-) ADH ODC Fermentação Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

índice sair Enterobacter Diagnóstico diferencial Enterobacter Lac+ CiSi+ Enterobacter Klebsiella Serratia LDC,ODC,ADH Motilidade DNase Fermentação E.cloacae Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

índice sair Serratia Espécies de Serratia Glic.+ / gás- sac. - CiSi + urease - H2S - TDA - indol - LDC + Mov. + CiSi + Lac - LDC,ODC, malonato, fermentação , pigmento DNase + Gelatinase + Lipase + Marcadores: Sorotipagem Met.moleculares

Espécies de Citrobacter sair índice Espécies de Citrobacter Glic.+ / gás- sac =V urease - H2S = V TDA - indol = V LDC - Mov. + CiSi + Lac + ODC, indol, H2S malonato fermentação

índice sair Proteus - Providencia - Morganella Diagnóstico diferencial Glic.+/ gás - sac. - urease + TDA + H2S = V indol = V LDC - Mov. + Proteus Providencia Espécies H2S + BGN NF Swarming TDA, H2S, ODC, gelatinase, fermentação CiSi + Lac +

índice sair Fluxograma BGN Oxidase Lac + Lac - Ágar Mac Conkey IAL IAL Shigella Salmonella Serratia Proteus Providencia Morganella E.coli Enterobacter Klebsiella Kluyvera Citrobacter Enterobacter Klebsiella Kluyvera Citrobacter Salmonella Serratia Proteus/Prov.(V) VP + + + Cit. Simmons Cit. Simmons - - Shigella Morganella E.coli

índice sair IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS Enterobactérias em microbiologia clínica  Poucas espécies Espécies incomuns , novas espécies, espécies atípicas  podem ocorrer (isoladas de material clínico, ambiente, plantas e animais) PROBABILIDADES Tratar-se de uma espécie rara Cepa contaminada Uma ou mais testes não adequados na identificação ( turvação) Manipulação errada ( concentração do inóculo) Composição e quantidade do meio ( substrato presente) Controle de Q

índice sair IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS O que fazer? Checar tudo: Pureza da cultura Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizando os meios anteriormente utilizados Repetir todos os testes em outro sistema de identificação ou utilizar partidas diferentes do meio. Encaminhar para laboratórios de referência

índice sair Considerações finais Importância da caracterização das espécies Evitar falsos surtos Não identificação do surto Atenção para cepas atípicas Atenção para espécies raras Atenção para pureza das culturas