ANÁLISE DO PERFIL DE METILAÇÃO DO GENE MMP-14 EM LINHAGENS TUMORAIS DE MAMA Ana Carolina Paschoalini Mafra – Iniciação Científica / PIBIC/CNPq Orientador: Giseli Klassen / Colaboradores: Edneia Ramos e Andressa Chequin O câncer de mama é a principal causa de morte entre as mulheres, sendo um problema de saúde pública mundial[1,2]. A epigenética estuda as modificações da estrutura tridimensional do DNA que interferem na expressão de genes. Por esse motivo, a epigenética pode estar intimamente ligada ao agravamento de patologias, como o câncer de mama[3]. As metaloproteases de matriz (MMPs) são conhecidas por estarem envolvidas na progressão do câncer através do processo de metástase[4]. Este projeto propõe a análise da regulação da expressão epigenética do gene da metaloprotease MMP14 em linhagens tumorais de mama e sua correlação com o potencial metastático das mesmas. INTRODUÇÃO / OBJETIVOS RESULTADOS / DISCUSSÃO Planejamento dos iniciadores. Representação da região promotora do gene MMP14 com duas ilhas de CpG, locais propícios para a metilação do DNA. Os iniciadores planejados para a clonagem e sequenciamento são representados pelas setas. METODOLOGIA EXTRAÇÃO DE DNA TRATAMENTO COM BISSULFITO DE SÓDIO NESTED-PCR CLONAGEM SEQUENCIAMENTO AVALIANDO A METILAÇÃO NAS LINHAGENS Linhagens: MDA-MB 231, MDA-MB 435, HB4a C3.6, HB4a C5.2 e MCF-7. CULTIVO CELULAR RT-PCR do gene MMP14 e GAPDH em linhagens tumorais de mama. O resultado acima mostra as linhagens que expressam o gene MMP14, sendo que a única que não expressa é a MCF-7. Para verificar se a expressão da MMP14 é regulada pela metilação do DNA, seguiu-se com as etapas de clonagem e sequenciamento. Perfil de metilação da região promotora do gene MMP14 na linhagem MCF-7. Após o sequenciamento, pode-se observar as ilhas de CpG com mais de 90% de metilação, indicando que este processo regula negativamente a expressão da proteína MMP14 na linhagem MCF-7. CONCLUSÃO Neste trabalho foi confirmada a regulação da expressão de uma metaloprotease de matriz por mecanismos epigenéticos, no caso a metilação do DNA. A alteração dessa regulação pode controlar alguns processos envolvidos no câncer de mama, como a metástase, denotando a importância deste estudo. Os próximos passos são padronizar os métodos de análise para a clonagem e sequenciamento desse gene e estudar todas as ilhas de CpG da região promotora, para maior entendimento da relação epigenética – metástase. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS [1] JEMAL, A.; BRAY, F.; FERLAY, J. Global Cancer Statistics. CA Cancer Journal, v. 61, n. 2, p. 69-90., 2011. [2] INCA. Estimativas 2012: Incidência de câncer no brasil. Instituto Nacional do Câncer. M. D. S. D. B. D. E. http://www.inca.gov.br. Rio de Janeiro 2011. [3] NOWSHEEN, S.; AZIZ, K.; TRAN, P. T. et al. Epigenetic inactivation of DNA repair in breast cancer. Cancer letters, p. 1-10., 2012. [4] ARTACHO-CORDÓN, F.; RÍOS-ARRABAL, S.; LARA, P. C. et al. Matrix metalloproteinases: Potential therapy to prevent the development of second malignancies after breast radiotherapy. Surgical oncology, p. 1-9., 2012.