Imunologia no Quadro da Patologia e Análises Clínicas Importância da Detecção de Ag e AC: Elucidar processos patológicos Diferenciar as fases das doenças Selecionar Doadores de Sangue Selecionar doadores e receptores de órgãos transplantados Avaliar o prognóstico das doenças Avaliar a eficácia da terapêutica e da suspensão da terapêutica
Testes Sorológicos Algumas técnicas usadas Chamados Imunoensaios Marcados Não marcados Multiparamétricos Respeitar Regras Controle Rigoroso Técnicas Padronizadas Controle de Qualidade Algumas técnicas usadas Eletroforese Imunoblotting Citometria de Fluxo Imunofluorescência PCR / Real Time PCR Precipitação / Imunodifusão Aglutinação ELISA RIA Nefelometria Turbidimetria Automação
Eletroforese (SDS-PAGE)
Transferência Gel/ membrana/ filtro Tampão ( +) ( - ) Gel Membrana transferência preenchimento suporte Papel filtro
Imunoblotting ou Western Blotting (proteínas ou glicoproteínas) SDS-PAGE 2. Transferência 3. Bloqueio (BSA ou Leite) 4. Solução AC 5. Quimioluminescência ou Iodo126 6. Revelação 7. Densitometria óptica Determinação [proteínas] Imunoprecipitação: Anticorpo 12-14 h Proteína-A Sepharose Lavagem Centrifugação Tampão Laemnli SDS-PAGE Anticorpo (Overnight) Proteína-A 126I Densitometria Óptica das bancas Amostra
Imunofluorescência 3 Tipos: Direto: Passos 1 e 2 (Ac marcado com fluorocromo). Usado para pesquisa de AC em células (imunocitoquímica) e tecidos (imunohistoquímica) Ex da aplicabilidade: biópsia de doenças imunológicas (pele, rins, sífilis, herpes simples, varicela-zoster) 2. Indireto: Usado para aumentar a sensibilidade do método Passos 1, 2 e 3 3. Sistema Avidina-Biotina: Técnica de amplificação Avidina+Biotina = complexo Avidina pode ser saturada com fluoresceína (verde), ficoeritina (vermelha), peroxidase (M. óptica), ferritina (M. eletrônica). Várias biotinas podem se ligar ao AC = amplificação da fluorescência interesse