Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentação Laboratorial Eletroforese Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentação Laboratorial
Definição: Separação de moléculas em um campo elétrico de acordo com o tamanho, forma ou a carga elétrica. Tem aplicações nas áreas de análises clínicas, moleculares e genéticas.
Aplicações da eletroforese 1 – detectar a presença de um gene no DNA de um indivíduo 2 – testes de paternidade 3 – diagnóstico de anemias (exemplo: anemia falciforme) 4 – diagnóstico de deficiências de anticorpos (imunoglobulinas) 5 – controle da qualidade do DNA e RNA que serão analisados
Etapas da eletroforese Extração e purificação do material; Aplicação do material em um suporte: gel de agarose, acrilamida, acetato de celulose; Imersão deste suporte em uma solução tampão que permita a transmissão da corrente elétrica; Aplicação da corrente elétrica em intensidade e tempo adequados, Visualização dos resultados.
Cuba e fonte para eletroforese
Tipos de gel: Agarose Usados para separar moléculas de DNA e RNA de acordo com seu tamanho. Podem ser usadas diferentes concentrações de agarose. Normalmente utiliza-se a 2%
Eletroforese de DNA
Tipos de gel: Poliacrilamida Usados para separar pedaços de DNA de tamanhos muito pequenos e proteínas.
Acetato de celulose Utilizado para separar diferentes tipos de hemoglobinas de acordo com sua carga elétrica.
Esquema da eletroforese de hemoglobina
Corrente elétrica As amostras de DNA, RNA e proteína migram para o pólo positivo, pois são carregadas negativamente. Certifique-se da posição do gel e a direção da eletroforese!
Tampão de corrida Para amostras de DNA e RNA o tampão deve ser o mesmo utilizado para diluir a agarose (TAE ou TBE). Para amostras de hemoglobina utiliza-se o tampão Tris em pH 8,5 (alcalino) ou tampão agarose pH 6,5 (ácido).
Análise dos resultados A visualização das diferentes bandas depende de coloração específica. DNA e RNA = brometo de etídeo ou SYBR green Proteínas = azul de coomassie e prata
DNA e RNA Marcadores de tamanho para DNA e RNA
DNA corado com SYBR green Marcador de tamanho (100 pares de base)
Proteínas