Diagnóstico das Leucemias na Infância

Apresentação em tema: "Diagnóstico das Leucemias na Infância"— Transcrição da apresentação:

1 Diagnóstico das Leucemias na Infância
Dra. Maria Lúcia de Martino Lee Instituto de Oncologia Pediátrica – UNIFESP/EPM

2 Desenvolvimento das Técnicas de Coloração
EHRLICH NEUTRÓFILOS   BASÓFILOS  ACIDÓFILOS ( Eo) Descrição morfológica das leucemias

3 SÉCULO XX Técnicas convencionais: morfologia e citoquímica
AVANÇOS TECNOLÓGICOS Técnicas convencionais: morfologia e citoquímica Imunofenótipo Citogenética convencional Genética molecular. Expressão genética/proteica.  Reconhecimento da heterogenecidade das leucemias

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5 SECULO XXI Reconhecimento subgrupos biologicamente homogeneos
Identificação fatores prognósticos Delineamento de tratamentos mais específicos

6 Diagnóstico e Classificação
Diagnóstico + classificação precisos = Essenciais para o estudo biológico e o sucesso terapêutico das leucemias infantis; Sistema de classificação ideal deve ser biologicamente relevante; Deve ser útil tanto ao onco-hematologista clínico, quanto ao pesquisador; Deve ser reproduzível e amplamente utilizável.

7 Diagnóstico das Leucemias
Sangue Periférico Mielograma Morfológico FAB Citoquímica POX/SB PAS Esterases Imunofenotipagem Linhagem Sub-linhagem Citogenética/ Genética Molecular Alterações: - estruturais - numéricas

8 Diagnóstico das Leucemias Avaliação morfológica
Infiltração MO Tu Leucemias Aplasia Medular Anemia Meg SMD PTI SHF HIV S.ChediakHigashi Calazar

9 Diagnóstico das Leucemias Avaliação morfológica
Aspiração seca: a avaliação será enfocada apenas no SP e no estudo histológico da BIÓPSIA de MO. Cerca de 20 % dos pacientes com leucemia não apresentam blastos circulantes ao diagnóstico.

10 Diagnóstico e Classificação das Leucemias
AGUDAS Representam 95 % das leucemias infantis Proliferação de células imaturas: BLASTOS. Sua enumeração na MO é fundamental para a definição diagnóstica de leucemia aguda. CRÔNICAS Representam 3 a 5 % casos das leucemias infantis. Proliferação de células relativamente bem diferenciadas.

11 Avaliação Morfológica/Citoquímica
Introduzidas na década de 60, algumas colorações citoquímicas (MPO, SBB, NSE) auxiliam na definição da linhagem e no diagnóstico de alguns subtipos de LMA.

12 Mieloperoxidase (MPO)
Cora os grânulos primários dos precurssores granulocíticos e menos intensivamente dos monócitos. Ainda é considerada a reação “gold standard” para a diferenciação morfológica entre blastos linfóides (negativos) e mielóides (positivos).

13 MPO

14 Negro de Sudan (SBB) Coloração não enzimática dos fosfolipídeos das membranas dos grânulos. Interpretação de positividade paralela a MPO, porém mais intensa.

15 Esterases não Específicas (NSE):
alfa naftil acetato ( ANA ) esterase alfa naftil butirato (ANB) esterase Cruciais para a determinação de monoblastos/monócitos. É descrita em escala de 0 a + 4, e somente em níveis +3 ou +4 é caracterizado o blasto como monocítico. Monócitos maduros reagem menos intensamente que monoblastos.

16 ANB esterase

17 Demais (PAS, Esterase Específica - CAE), Fosfatase Ácida, Ferro Medular): são atualmente de limitado valor diagnóstico. PAS

18 Diagnóstico e Classificação Morfológica / Citoquímica
Linfóides: Representam 80 % das leucemias infantis. Caracterizam -se pela presença na MO de >25 % de blastos de características linfóides. MIelóides: Representam 20% das leucemias infantis. Blastos constituem no mínimo 30% do total das cels nucleadas ou não eritróides da MO ou mais de 20% de acordo OMS.

19 Diagnóstico e Classificação Morfológica / Citoquímica
Classificação FAB (1976): Primeira a unificar a classificação das leucemias Permitiu a comparação entre diferentes protocolos terapêuticos Atualmente,ainda é a base citomorfológica para a classificação das LMA e SMD.

20 Diagnóstico e Classificação Morfológica / Citoquímica
FAB LLA LMA SMD (L1, L2, L3) (M1 – M6) 1985 (M7) (RA, RARS, AREB, AREBt, LMMC)

21 Outras classificações
Classificação MIC (1986): Classificação das LLA e posteriormente das LMA. Baseia-se em critérios morfológicos, imunológicos e citogenéticos. Classificação da OMS (2001): Inclui achados morfológicos/citoquímicos, além de características imunofenotípicas, genéticas e clínicas específicas.

22 Classificação Morfológica FAB LLA

23 Classificação Morfológica FAB - LLA

24 Classificação Morfológica FAB - LMA
M3v M4Eo a/b

25 LMA - M0

26 LMA – M1

27 LMA – M2

28 LMA - M2

29 LMA - M3v

30 LMA – M4Eo

31 LMA – M5

32 LMA – M6

33 LMA – M7

34 Proporção aproximada de casos LMA na infância por subtipos
2 10 25 22 4

35 Imunofenotipagem das Leucemias Agudas
Dra. Maria Lúcia de Martino Lee Instituto de Oncologia Pediátrica – UNIFESP/EPM

36 Imunofenotipagem das leucemias agudas (LA) Principais finalidades
Diagnóstico das LA Definir linhagem/ sublinhagem celular (mieloides,linfoidesB, linfoides T, NK) Definir estágio maturativo do blasto Detecção DRM Futuro Desenvolver e monitorar novas terapias alvo(enzimas de superfície, moléculas de adesão, receptores de citocinas

37 Citometria de Fluxo Metodologia
Fred Behm. Laboratory Studies of Acute Leukemia. In:

38 Citometria de Fluxo Metodologia
Fred Behm. Laboratory Studies of Acute Leukemia. In:

39 Citometria de Fluxo Vantagens do método
Mede múltiplos parametros em células individuais Grande número de células analisadas com rapidez Disponibilidade de amplo perfil de anticorpos específicos Análise de antígenos de superfície, intracitoplasmáticos e intranucleares

40 Rocha, Maria Hsu. Imunofenotipagem em Leucemia Aguda
Rocha, Maria Hsu. Imunofenotipagem em Leucemia Aguda. Instituto Fleury de Ensino e Pesquisa.

41 Imunofenótipo da LLA Fred Behm. Laboratory Studies of Acute Leukemia. In:

42 Desenvolvimento da linhagem mielóide
Fred Behm. Laboratory Studies of Acute Leukemia. In:

43 Imunofenotipagem Triagem Inicial – Painel de Marcadores
Linhagem Marcadores Imunológicos Linfóide B CD19 CD79a CD10 CD22 Linfóide T CD3 CD7 Mielóide Anti-MPO CD13 CD33 CD117 Não específica CD45 CD34 tdt

44 Classificação Imunológica das LLA Infantis
IMF Marcadores monoclonais CD19/ CD79a CD10 Cy Igs CD3cy % casos Pró B + - 1 Comum 50-60 Pré B 20-25 B +/- 3 T 18 MLL,t(4;11) TEL-AML, Hiperdiploidia t(1;19) t(8;14) Rocha, Maria Hsu. Imunofenotipagem em Leucemia Aguda. Instituto Fleury de Ensino e Pesquisa.

45 Classificação Imunológica da LLA T
Fred Behm. Laboratory Studies of Acute Leukemia. In:

46 Classificação Imunológica da LLA T
Marcadores positivos CD 3c, CD 7 CD5, CD2, tdt CD10 (45 %) CD45 Marcadores positivos/negativos CD19, CD 13, CD33 Marcadores negativos CD79a MPO CD1a, CD3, CD4, CD8 <45 % casos Subdividida 3 estágios maturativos: Dificíl correlação prognóstica

47 LLA com co-expressão de antígenos mielóides
Crianças: % Sem valor prognóstico independente CD19 CD10 CD79 CD33 (25%) CD22cy tdt CD13 (23%) CD15 (16%) CD14 (16%)

48 Imunofenotipagem na LMA
Essencial: LMA -MO LMA - M7 Auxiliar: LMA -M6 LMA - M3 LMA - 2 v LMA -M4Eo LMA - M5

49 Imunofenotipagem das LMAs
LMA minimamente diferenciada Marcadores positivos CD 13 CD 33 CD 117 Marcadores negativos MPO CD3c CD 79a c CD 22 c CD34,38,HLA-dr, tdt 1/3 dos casos CD 11b,15, as vezes CD2,7,19 fracos

50 Leucemia Megacarioblástica Aguda
Marcadores Positivos Plaquetários: CD 41, CD 42,CD 61 Marcadores Negativos ou Positivos: Mielóides: CD13 +, CD 33+,CD 117+ Marcadores Negativos: anti MPO, CD 34, CD 45,HLA - DR

51 Eritroleucemia Marcadores positivos Mielóides: CD117, CD13 Eritróides:
Glicoforina A Marcadores negativos anti MPO

52 Rocha, Maria Hsu. Imunofenotipagem em Leucemia Aguda
Rocha, Maria Hsu. Imunofenotipagem em Leucemia Aguda. Instituto Fleury de Ensino e Pesquisa.

53 Leucemia Aguda de Linhagem Ambígua
Leucemias agudas indiferenciadas Leucemias agudas bifenotípicas Leucemias agudas bi-linhagem

54 Leucemias Agudas Indiferenciadas
Amplo painel de marcadores negativos Em geral: CD34+, HLA-DR+, CD38+, CD7+, tdt+.

55 Leucemias Agudas Bifenotípicas
Concomitância de marcadores imunológicos no mesmo blasto Mielóide + B Mielóide + T T B 4-6% das leucemias agudas CD19  MPO CD22

56 Rocha, Maria Hsu. Imunofenotipagem em Leucemia Aguda
Rocha, Maria Hsu. Imunofenotipagem em Leucemia Aguda. Instituto Fleury de Ensino e Pesquisa.

57 Leucemia aguda bi-linhagem
Duas populações distintas de blastos expressando marcadores diferentes CD33 MPO CD13 CD19 CD22 CD79a 

58 Doença Residual Mínima
Técnicas moleculares (FISH, RT-PCR) Citometria de fluxo: fenótipos anômalos Assincronismo maturativo Infidelidade linhagem Anormalidades quantitativas Ausência de antígenos

59 DRM em LLA - SLE Rowe JM. Clinical Harmatology. Harcourt Çublishers, London, 2002.

60 Recidiva LLA vs DRM Rowe JM. Clinical Harmatology. Harcourt Çublishers, London, 2002.

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