UNIVERSIDADE FEDERAL DE OURO PRETO NÚCLEO DE PESQUIAS EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS ESCOLA DE MEDICINA LABORATÓRIO DE DOENÇAS PARASITÁRIAS Doença de Chagas Estado da arte e avanços na quimioterapia experimental Maria Terezinha Bahia XIII Encontro do Programa de Pesquisa Translacional em Doença de Chagas

Compostos nitroimidazóis ou nitrofuranos - benznidazol e nifurtimox Limitações - eficácia variável, longo curso de tratamento, toxicidade. Estratégias para superar essas limitações -Novas drogas, -Reposicionamento de drogas, -Novas formulações para as drogas disponíveis -Terapia de combinação.

Dose/tempo de tratamento (dias) Início do tratamento (dias) Controle de cura% cura Drogas candidatas- Compostos nitroheterocíclicos : Fexinidazol e seus metabólitos Fex - 100mg /204qPCR, Is56 Fex - 200mg/204qPCR, Is45 Fex-300mg/204qPCR, Is80 Sulfone- 100mg/204qPCR, Is100 Sulfoxide- 100mg/204qPCR, Is80 Fex - 300mg/kg10qPCR, Is89 Fex - 300mg/kg120qPCR, Is70 Fex - 300mg/kg10qPCR, Is78 Cepa Colombiana Cepa VL-10 Cepa Y Bahia et al, 2012, 2014

Inibidores de Cisteína Proteinase inibidores irreversíveis - vinyl sulfone (K777) (Doyle -2010) Cepa do parasito– CAI/72 /camundongos C 3 H Inicio do tratamento- 24h após a inoculação Controle de cura – Hemoculturea e PCR 80% de resultados negativos 4/5)

(Ndao - et al, 2014) Cepa do Trypanosoma cruzi – Brazil/camundongos CD-1 Início do tratamento - 2 dias após a inoculação/26 dias Dose Cz007/C008 – 3, 10 e 50mg/kg (misturado á ração) Tratamento de referência- benzindazole – Bz 50mg/kg (misturado à água) Controle de cura– PCR e imunossupressão com ciclofosfamida GruposDose (mg/kg)-qPCR Veículo-0/10 Bz505/10 Cz007 39/10 104/19 506/10 Cz008 37/10 106/10 505/10 Resultados negativos da qPCR – sangue, coração e esôfago Curva de parasitemia Inibidores reversíveis da Cisteína Proteinase Cz007 e Cz008

Candidato a droga - Azole derivative VNI 25 mg/ 30 dias 1 PCR – sangue e tecidos mg/ 30 dias 90 PCR –sangue e tecidos mg/25 dias FBE, CyI, PCR- sangue 0 Cepa colombiana Tulahuen- clone 20-A Vilallta et al, 20013, Soeiro et al, 2013 Dose/tempo de tratamento (dias) Início do tratamento (dias) Controle de cura% cura

Candidato a droga - Azole derivative posaconazole 20mg/434sorologia+ HC mg/204Hc, PCR, Is80 20 mg/204Hc, PCR, Is60 20mg/434Serology + HC75 20mg/43120Serology + HC50 20 mg/434Serology + HC50 20/2010Hc, PCR, Is0 Cepa Colombia VL-10 strain Cepa Y Molina et a, 2000, Bucner et al, 2012, Diniz et al 2013, Caldas et al, 1014 O posaconazol não foi eficaz no tratamento de pacientes na fase crônica da doença de Chagas como único medicamento (Molina et al, 2014) Dose/tempo de tratamento (dias) Início do tratamento (dias) Controle de cura% cura

Dose/time daysOnset treatmet days Cure control% cure Drug Candidate - Azole derivative Ravuconazole and its prodrug E1225 Rav - 30mg/434HC, Xd58.3 Rav - 20 mg/204qPCR, Is30* E1224 – 10-50mg/204qPCR, Is * Rav-20mg/434HC, Xd0 E mg/204qPCR, Is0* E mg/2010qPCR, Is0* E mg/2010qPCR, Is0* Cepa Colombiana Ceap VL-10 Y strain Urbina et al, 20013, unpublished data* O E1224 não foi eficaz no tratamento de pacientes na fase crônica da doença de Chagas como único medicamento ( Faustino Torrico, Annual Meeting of the American Society of Tropical Medicine and Hygiene November 2013 )

Terapia de Combinação - Posaconazol + Benznidazol Bz -100mg/20 5FBE, PCR and IS 100 Bz-100mg/100 Ps-20mg/1050 Bz+Ps – Bz-100mg/10 60 FBE, PCR and IS100 Bz-100mg/50 Ps-20mg/50 Bz+Ps mg/516.7 Cepa Tulahuen Cepa Y Bz/100mg/20 10 FBE, PCR and IS 14.3 Bz/100mg/100 Ps/20mg/1050 Bz+Ps mg/1050 Cencig et al, 2013 Dose/tempo de tratamento (dias) Início do tratamento (dias) Controle de cura% cura

Terapia de Combinação– Posaconazole + Benznidazole Bz-100mg/20 4FBE, Hc, PCR and IS 70 Ps -20mg/2080 Bz-50mg/200 Ps – 10mg/2043 Bz+Ps 50+10mg/2090 Bz-100mg/20 10 FBE, Hc, PCR e IS 0 Ps -20mg/200 Bz+Ps -100mg+20/2030 Cepa Y Diniz et al, 2013 Cepa VL-10 Dose/tempo de tratamento (dias) Início do tratamento (dias) Controle de cura% cura

Terapia de Combinação- E Benznidazol Bz-100mg/20 4FBE, Hc, PCR e IS 25 E mg/200 Bz + E mg/20100 Bz/100mg/ E1224 /50mg/200 Bz + E mg/200 Cepa colombiana Dados não publicados Dose/tempo de tratamento (dias) Início do tratamento (dias) Controle de cura % cura

Considerando Aparentemente, a resistência ao Bz seria devido a uma resistência genética a drogas: A resistência pode ocorrer naturalmente na ausência de exposição a droga (+ de 10 anos de infecção em cães), e também pode ser revertida quando mantida por passagens seriadas em camundongos. (Santos et al, 2008, Caldas et al, 2008). A cepa Colombiana não é mais resistente in vitro do que a cepa Brasil, que é muito sensível in vivo. (Bustamante et al, 2014) A resistência In vivo se torna mais evidente com o decorrer da infecção. (Bustamante et al, 2014) A procura novas formulações farmacêuticas para benznidazol seria uma decisão sábia. Uma nova formulação de Bz disponível como 12,5 mg comprimidos dispersáveis, foi registrada no Brasil pela LAFEP - A atividade do benznidazol em humanos não foi superada por qualquer outra droga

Metabolização do Benznidazole no Trypanosoma cruzi e em mamíferos Morilla et al Mudanças radicais no ADMET (absorção, distribuição, metabolização, excreção e, toxicicidade) do benznidazol são necessárias A abordagem nanotecnológica poderia ser fornecer formulações mais eficazes, melhor toleradas e mais baratas de nanomedicamentos a serem administrados por via não parenteral.

Projeto colaborativo BERENICE lançado em BERENICE está focado no desenvolvimento de: Solid lipid nanoparticles (SLN) e Small unilamellar vesicles (SUV) - Com o objetivo de obter uma libertação controlada e melhorar as propriedades farmacológicas de benznidazol. Problemas que podem ocorrer (Morilla et al, 2015) -- Devido ao seu tamanho na ordem de dezenas a centenas de nanómetros, seria difícil a entrada direta das SLN e SUV na circulação sistêmica quando aplicada por via sublingual (poderiam atuar como depósitos de drogas que ficariam retidas nas células epiteliais da mucosa). Desafios para formulações muco-adesivas para administração sublingual: - Retenção prolongada da droga. -Perfil desejável de liberação do fármaco, -Permeação adequada do fármaco.

Benznidazole-SNEDDS (sistema auto-emulsionante de liberação de drogas) Eficácia do benznidazole-SNEDDS na infecção de camundongos pela cepa Y Novas formulações baseadas em nanocarreadores Melhorar a eficácia de drogas antigas - melhorar o perfil farmacocinético e de biodistribuição. Modifica o perfil de plasmático do benznidazol -Reduz a Cmax, retardando a taxa de absorção, mas aumentando a AUC com um perfil de concentração plasmática sustentada após uma única dose oral [Mosqueira V., data not published].

Em conclusão.... Ainda não temos dados suficientes para prever se a nanomedicina vai oferecer melhores tratamentos para a doença de Chagas ou não.

Obrigada