DICIPLINA DE GENÔMICA II PCR-RFLP E SEQUENCIAMENTO UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS CENTRO DE DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO CURSO DE GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA DICIPLINA DE GENÔMICA II AULA PRÁTICA: PCR-RFLP E SEQUENCIAMENTO Helena Strelow Thurow Pelotas, abril de 2011
PCR-RFLP
Fragmento amplificado: 199pb Sitio da Enzima BstUI: CGCG
Enzymatic cleavage analysis digestão – AciI ou SfcI DNA PCR eletroforese an á lise em gel Enzymatic cleavage BstU I Electrophoresis Enzyme Agarose gel analysis
Amplificação do fragmento do SNP Arg72Pro 199pb
Genotipagem das amostras para o SNP Arg72Pro 199pb Títulos, mudar a foto da genotipagem 113pb Arg Arg Arg Arg Pro Arg Pro Arg Pro Pro Arg Pro Arg Arg Arg Arg 86pb
Arginina
Prolina Arginina
Prolina
SEQUENCIAMENTO
2ul 2ul 2ul vortex + sequenciamento Pré-mix Primer DNA 2ul 2ul 2ul vortex + sequenciamento
PRÓXIMAS ETAPAS... PURIFICAÇÃO SEQUENCIAMENTO