Aplicações da Eletroforese Capilar

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1 Aplicações da Eletroforese Capilar
Universidade Federal de Pelotas Disciplina de Genômica II Docente: Fabiana Seixas Aplicações da Eletroforese Capilar Ana Carolina Peiter Larissa Brussa Reis Micaela Domingues Rômulo Silva de Oliveira Stefani Natali Stoll Pelotas, 02 de maio de 2012.

2 O que é Eletroforese? Transporte em solução eletrolítica
Influência de um campo elétrico. A eletroforese transporte em solução eletrolítica de compostos carregados eletricamente sob a influência de um campo elétrico, no qual a separação entre dois solutos ocorre de acordo com diferenças entre suas mobilidades eletroforética. Diferenças de mobilidades

3 Histórico Eletroforese capilar -1981, por Jorgenson e Lukacs
~ à técnica tradicional. Tubo capilar, preenchido com um eletrólito.

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5 CAMPOS ELETRICOS ALTOS ALTA EFICIENCIA E RESOLUÇÃO
O que é EC? Conduzida em TUBOS CAMPOS ELETRICOS ALTOS BAIXO TEMPO ALTA EFICIENCIA E RESOLUÇÃO 15 a 100 µm /50 a 100 cm Na eletroforese capilar, a separação é conduzida em tubos com dimensões de 15 a 100 µm de diâmetro interno, e 50 a 100 cm de comprimento, preenchidos com um eletrólito condutor, e submetidos à ação de um campo elétrico. É uma técnica de separação - neutros, iônicos ou ionizáveis, através de uma solução (eletrólito) contida no interior de um tubo capilar (sílica fundida, teflon), mediante a aplicação de um campo elétrico.

6 Fluxo Eletroosmótico Grupos silanóis (SiOH) - (SiO- + H+)- soluções tampão. ânodo cátodo

7 Principais vantagens Alta eficiência Baixo tempo
Fatores Geométricos Pequena demanda de amostra Injeção e Detecção Alta eficiência Baixo tempo Devido a fatores geométricos (a relação entre a área superficial interna e volume é apreciavelmente grande), um capilar possibilita a dissipação eficiente do calor, gerado pela passagem da corrente elétrica (efeito Joule).

8 Variações da EC Eletroforese capilar de zona (CZE)
Cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) Focalização isoelétrica capilar (CIEF) Eletroforese capilar em gel (CGE) eletroforese capilar de zona (CZE), cromatografia eletrocinética micelar (MEKC), isotacoforese capilar (CITP), focalização isoelétrica capilar (CIEF), eletroforese capilar em gel (CGE) e eletrocromatografia capilar (CEC)

9 Variações da EC Eletroforese capilar de zona (CZE)
Capilar e os reservatórios - cheios com um tampão. Corrente Elétrica + Poder Tamponante

10 Separa Moléculas neutras
Variações da EC Cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) Variação da CZE Separa Moléculas neutras Na cze migram na mesma velocidade, já que não estão sob a influência do campo elétrico

11 pI não ocorre migração sob a ação de um campo elétrico
Variações da EC Focalização isoelétrica capilar (CIEF) Separação -PI pI não ocorre migração sob a ação de um campo elétrico s anfólitos carreadores Anfólito carreador

12 Variações da EC Eletroforese capilar em gel Separação pelo tamanho
Migração através da matriz do gel separação é realizada com base na diferença entre o tamanho das moléculas dos analitos; sendo assim, a maior ou menor facilidade com que os analitos de diversos tamanhos migram através da matriz de gel é que produz a separação Ausência de Fluxo Eletroosmótico

13 Variações da EC Eletroforese capilar em gel Oligo-nucleotideos
PROTEÍNA Eletroforese capilar em gel

14 Variações da EC Rede Polímérica Eletroforese capilar em gel
Colóides liofílicas-poliacrilamida; Colóides liofóbicos-agarose. Eletroforese capilar em gel Rede Polímérica

15 Vantagens gerais da EC RAPIDEZ VERSATILIDADE BAIXO CUSTO POR ANÁLISE
ALTO PODER DE SEPARAÇÃO

16 Limitações gerais da EC
Não é adequada para: DETERMINAÇÃO DE COMPOSTOS VOLATEIS NÃO POLARES

17 Sequenciamento de DNA

18 Relembrando... Maxam & Gilbert Método Químico (EUA) Sanger &Coulson Método enzimático (Reino Unido) DEF.:O sequenciamento de DNA é um processo que determina a ordem dos nucleotídeos em uma amostra -Mét. Quím: Tratamento com substâncias químicas que cortam a molécula de DNA em nucleotídeos específicos • Método de degradação química – substâncias químicas, caracterização de oligonucleotídeos ou no seqüenciamento de estruturas ricas em GC -Método enzimático, dideóxi ou do término da cadeia: Síntese enzimática de uma fita complementar, cujo crescimento é interrompido pela adição de um dideoxinucleotídeo)

19 Método de Sanger -Não encontra extremidade OH livre e pára a reação, não consegue incorporar proximo nucleotideo -Sua estratégia consiste em identificar,continuamente e sequencialmente durante o processo, o último nucleotídeo incorporado na extremidade de alongamento da cadeia. -Como todos os nucleotídeos normais (dNTPs) estão presentes, o alongamento da cadeia prosseguirá até que a enzima DNA-polimerase insira um análogo (ddNTP). Consequentemente, haverá parada imediata da reação de síntese no ponto em que seu alongamento foi interrompido: na extremidade e, a molécula estará marcada com ³²P.

20 Método de Sanger Molécula Nativa Desnaturação Cadeia simples = MOLDE!
-o processo é realizado a partir de uma cadeia simples (não dupla) do DNA a ser sequenciado; esta servirá de molde para gerar a outra metade complementar da dupla hélice. Isto é obtido pela desnaturação da “molécula nativa” -é necessário também, a presença na reação, de um pequeno fragmento de DNA sintético (XXX) complementar a uma região conhecida (YYY) na extremidade 3’ do DNA molde; estas características permitirão sua hibridização no local mencionado, e fornecerão um ponto de partida para a replicação do DNA. O fragmento XXX, denominado iniciador ou “primer", quando marcado, poderá ser utilizado para rastrear o fragmento de DNA recém sintetizado no lugar do dNTP. Fato importante no processo é que ele é executado em quatro reações separadas; cada uma delas, contendo adicionalmente pequena quantidade de um (e apenas um) dos 4 tipos de cada dNTP sob a forma de análogo, 2’, 3’-didesoxinucleotídeo trifosfatos (ddNTPs) (fig 2b).

21 Manual X Automático -4 reações separadas, mesmo marcador.: isotopos radioativos. Manual leitura 1 reação. Cada base: dideoxi: um flouróforo que quando incorporado, emite luz, e essa é captada e entendida pelo aparelho. Leitura automatica

22 Eletroforese Capilar (Sanger- Automatizado)
PCR tradicional Purificação do produto Nova PCR (placa) Purificação da placa Sequenciamento Análise dos resultados PURIFICACAO: 3 MANEIRAS: Kit GFX (GE Healthcare), de enzimas ou de PEG 8000. -Os ácidos nucléicos migram para o ânodo, pois em pH neutro sua carga é negativa Entretanto, no sequenciamento automático os nucleotídeos estão marcados com fluorocromos ao invés de isótopos radioativos. Quatro diferentes fluorocromos são empregados e uma vez excitados por um feixe de laser emitem luz em diferentes comprimentos de onda. É possível marcar com estes fluorocromos o "primer" universal M13 ou então cada um dos dideoxinucleotídeos (terminadores). Assim, uma vez que em cada uma das reações (A, T, C, G) foi empregado um fluorocromo diferente é possível juntar estes produtos e realizar a corrida em uma única raia do gel de sequenciamento. Os produtos da reação de sequenciamento, marcados com os fluorocromos, ao serem submetidos a eletroforese passam pelo feixe de laser, que promove a excitação dos fluorocromos. A luz emitida pelos fluorocromos é detectada por um fotomultiplicador e a informação é processada através de um computador (Figura 2).

23 1) PCR COMPONENTES: DNA molde dNTP’s DNA Polimerase Primer Magnésio
Tampão Água PROGRAMA: 94 0C por 5 min 94 0C por 1 min 55 0C por 1 min 72 0C por 1 min 72 0C por 5 min 4 0C 35 ciclos

24 2) Purificação do produto de PCR
3 formas Kit GFX Enzimas PEG 8000 2.1) COM KIT: GFX PCR DNA (GE Healthcare) 1 de 50 ul 2 de 25 ul Volume final 50ul Purificar Eluir 25ul gel de agarose 5ul Para purificação com o kit GFX, são necessários produtos de PCR com os seguintes volumes finais:  Volume final de 50ul: 1 PCR de 50 ul ou 2 PCRs de 25ul. Purificar e eluir em 25ul. Correr em um gel de agarose 5ul para verificar o resultado da purificação e congelar o restante.

25 2) Purificação do produto de PCR
2.2) COM ENZIMAS Exonuclease I (EXO I) -GE Healthcare- E70073Z (2.500U) Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) - GE Healthcare - E70092X 5000U

26 Pós-purificação Condições para a reação de seqüenciamento:

27 3) Nova PCR Mix: dDNTP´s, agua, polimerase, tampao, Mg
PCR purif + Primers (R/F) Nova PCR (DNA + Primers+ MIX) Mix: dDNTP´s, agua, polimerase, tampao, Mg

28 Poços não utilizados: água
3) Nova PCR 2ul de pré-mix 1ul do primer 2ul de DNA Vortex Spin Termociclador Poços não utilizados: água 1) Preencher o formulário fazendo a montagem da placa e identificar a placa em uso; 2) Pipetar no fundo dos poços da placa 2ul de pré-mix (marrom); 3) Adicionar na parte da frente de cada poço 1ul do primer; 4) Adicionar na parte de trás de cada poço 2ul de DNA (virar a placa e pipetar do outro lado do poço); 5) Verificar se todos os poços foram preenchidos. Aqueles que não serão utilizados devem ser preenchidos com 5ul de água; 6) Lacrar muito bem a placa com a fita adesiva ou com as tampas para strip; 7) Passar no vortex e fazer um spin na centrifuga com o programa 4 (3700rpm por 1 min); 8) Verificar se todos os poços possuem em torno de 5ul e se todo o conteúdo está depositado no fundo do poço; 9) Colocar a placa no termociclador e selecionar o programa MEGA OU MEGABACE com a seguinte programação Lacrar!

29 3) Nova PCR

30 Purificação da Placa- Protoloco
Sequenciador Purifica para tirar os MIX- limpar o DNA, elue com 5microlitros Buffer, vortex, spin, e sequencia, se não: freezer

31 5) Sequenciamento MEGABACE
Sequencing e não Genotyping; RINSE TIPS limpeza dos capilares FLUSH AND DRY X semana MATRIX FILL AND PRERUN: matriz INJECT SAMPLES AND RUN (lado da placa correto) Placa com o LPA/ 180 minutos Pós: Store Cappilars (25ºC) FLUSH AND DRY CAPPILARS deve ser feito somente uma vez por semana, pois neste processo a água é jogada com força nos capilares o que provoca desgaste. -MATRIX FILL AND PRERUN para o preparo dos capilares com a matriz. Será necessário: metade da placa preenchida com LPA (48 poços) e tubos com LPA matriz (tubos brancos). -deve-se tomar o cuidado para que o lado da placa que contém as amostras seja colocado virado para frente do seqüenciador -Em poucos minutos, o seqüenciador irá pedir para que seja colocada novamente a placa com o LPA. Aguardar o seqüenciamento terminar: em torno de 180 minutos -STORE CAPILLARS (estado de repouso a 25°C) Será necessário: tanque com água e os tubos com água.

32 4) Análise dos resultados (Cromatograma)
Picos Linha de base Distância entre picos Picos mal definidos e de tamanho pequeno. Linha de base confusa. Distância entre picos anterior e posterior inconstante. Qualidade: BAIXA

33 4) Análise dos resultados (Cromatograma)
Picos Linha de base Distância entre picos Picos razoavelmente bem definidos e de tamanho médio. Linha de base boa a razoável. Distância entre picos anterior e posterior razoável. Qualidade: MÉDIA

34 4) Análise dos resultados (Cromatograma)
Picos Linha de base Distância entre picos Picos bem definidos e grandes. Linha de base boa. Distância entre picos anterior e posterior constante. Qualidade: ALTA

35 Genotipagem Processo pelo qual identificamos cada polimorfismo de interesse para um grande número de indivíduos

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37 Tudo parte pelo o DNA a ser analisado...
Análise dos fragmentos de DNA amplificados por PCR Sequenciamento de DNA Eletroforese Capilar

38 Em animais Melhoramento clássico (seleção de indivíduos pelo seu fenótipo) Escolhas de características como: carcaça, leite, sexagem, doenças....

39 Em Microorganismos Antes dos capilares, sequenciadores...
(Tipagem por testes morfológicos e bioquímicos, sensibilidade a fagos, sensibilidade a bacteriocinas, perfis imunológicos e perfis de susceptibilidade a agentes antimicrobianos). genes para proteínas da superfície celular genes de resistência a antibióticos genes codificando para o rRNA 16S.

40 Em Plantas Melhoramento genético
Características comerciais: produção de amido; açúcar; Resistência a pragas; Resistência adversidades climais;

41 Em Humanos: Paternidade; Doenças hereditárias; Criminalistica;
Medicina individualizada; Oncologia;

42 Técnicas com Eletroforese Capilar

43 Preparação das amostras
1. Análise de AFLP Criação de mapas genéticos para novas espécies Determinação de parentesco entre as cultivares Estabelecimento de grupos de ligação em cruzamentos Diversidade genética e molecular Estudos de filogenia Variações nos padrões das banda permitem os indivíduos ser genotipados ou diferenciados com base sobre os alelos que carregam. Extração de DNA Enzimas de Restrição PCR Preparação das amostras Eletroforese Capilar Análise dos dados

44 2. Análise ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat)
(ISSR) PCR é uma maneira rápida e barata com base na variação nas regiões entre os microssatélites. Este método tem uma grande variedade de usos, incluindo: Purificação do DNA Design de Primer PCR Preparação das amostras Eletroforese Capilar Análise dos dados • Caracterização da relação genética entre populações, Impressão digital genética, • Marcação de gene, Detecção de variação clonal, • Identificação de cultivares, • Análise filogenética, • Detecção de instabilidade genômica, • Avaliação de hibridização.

45 3. Os microssatélites STR
Os locos de microssatélites conhecidos como STRs (short tandem repeats ou repetições curtas consecutivas) apresentam alelos ou fragmentos de DNA de 100 a 300 pb; Estudos de mapeamento de ligação; Estudos de associação e identificação de organismos.

46 3.1. Instabilidade microssatélite
Descreve a fidelidade reduzida durante a replicação do DNA repetitivo frequentemente que ocorrem nas células tumorais.

47 Purificação do DNA Template Reação de Sequenciamento
4. SNP Genotyping São variantes de DNA comuns presentes em todo o genoma humano SNPS têm sido mostrados para ser responsável por : diferenças nas características genéticas, susceptibilidade a doenças e resposta a terapias de droga. Purificação do DNA Template Design de Primer PCR Limpeza da Amostra Reação de Sequenciamento Limpeza da Reação Eletroforese Capilar Análise dos Dados

48 5. RFLP T-RFLP análise é uma técnica utilizada para estudar comunidades microbianas complexos baseados em variação no gene 16S rRNA. Tem sido usado para examinar as populações bacterianas em diversos ambientes naturais e compreender a estrutura da comunidade e dinâmica em resposta a alterações nos parâmetros ambientais ou fisiológico.

49 Artigos Científicos, Teses e Dissertações
Aplicações Artigos Científicos, Teses e Dissertações

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51 Utilização acoplada à espectrometria de massa:
Poder de resolução e eficiência da CE Universalidade e sensibilidade da MS Solutos que apresentam pequenas variações no tempo de migração, ou até mesmo que migram com a mesma velocidade, podem ser identificados.

52 Nos últimos 20 anos... CE+MS notoriedade crescente como ferramenta analítica Anualmente, a Electrophoresis, dedica uma edição especial inteira a trabalhos exclusivos com CE-MS.

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54 Métodos analíticos aplicados a análises clínicas
Baixa disponibilidade de amostra Testes pediátricos, geriátricos e forenses Menos que 10 nL de amostra por injeção

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56 Cromatografia capilar eletrocinética micelar
Separar cafeína e outros derivados em amostras de saliva, soro e urina Alíquotas aplicadas diretamente sem qualquer pré-tratamento A resolução e a reprodutibilidade foram satisfatórias e somente 2 min foram consumidos para se efetuar a análise. Eletroforese capilar Sensibilidade, precisão e especificidade Tempo de análise 2x menor Cromatografia líquida de alta eficiência Método equivalente Consumo de solvente é 100 vezes maior

57 Conclusão Ferramenta valiosa na separação simultânea de metilxantinas e outros compostos com funções químicas diversas. Sensibilidade, precisão e exatidão satisfatórias.

58 Análise de resíduos de pesticidas em alimentos
Análise de ácidos nucléicos, bem como seus adutos, por detectar níveis bem abaixo dos permitidos por lei. Adutos de benzopireno foram avaliados, uma vez que são compostos policíclicos aromáticos presentes no meio ambiente.

59 Clínica Metabólitos (hemoglobina glicada, cetoácidos, hormônios), Forense: investigação de drogas (canabinóides, anfetaminas) em fluidos alternativos Ambiental Emissões veiculares (aldeídos e cetonas) e águas de abastecimento (pesticidas). Fármacos Pureza, qualidade de fármacos anti-retrovirais (AIDS) e anti-câncer (ftalocianinas metaladas). Alimentos Constituintes (carboidratos, ácidos graxos, ácidos carboxílicos,), aditivos (corantes e vitaminas) e contaminantes (pesticidas). Produtos naturais Extratos vegetais (compostos fenólicos), óleos essenciais e hidrolisados de proteína de interesse fitoterápico.

60 Eletroforese Capilar como ferramenta analítica para a toxicologia forense

61 Fármacos e drogas de abuso de interesse forense
Cloridrato de Metanfetamina designer drugs - Ectsasy Agente simpatomimético cloridrato de cocaína - crack Heroína - diacetilmorfina Morfina Fármacos e drogas de abuso de interesse forense anfetamina, metanfetamina e metilenodioxianftaminas: países do hemisfério norte – administradas peincipalmente via intranasal ou oral – doses variam de 5 a 15mg, pico de concentração plasmático é atingido em 2 horas – designer drugs (metilenodioximetanfetamina): mais consumidas no ocidente, com efeitos psicotroficos como capacidade aumentada da comunicabilidade, empatia e auto-conhecimento, o que distingue esta classe de compostos típicos. Cocaína: uso milenar entre os indígenas latino-americanos atraves do mascamento de folhas- poderoso agente simpatomimético, com efeitos estimulantes no SNC – dinfundido como pó para inalação (cloridrato de cocaína) e como crack. Em 1997, o crack representava 24,6% das drogas usadas por crianças e adolescentes em são paulo. 3. Opiáceos: comum hemisfério norte – Heroína (diacetilmorfina) – mais comuns via endovenosa, pulmonar ou intranasal – principal produto encontrado no organismo é a morfina, pois é convertida em até 24 hrs. A morfina é usada para fins terapeuticos no tratamento de dor aguda, é necessário diferenciar sua presença em situações terapêuticas das situações de uso da droga ilícita.

62 Detector por arranjo de diodos
Elaboração de sistemática analítica para determinação de drogas de abuso e seus produtos, empregando a técnica de Eletroforese Capilar. OBJETIVO Soluções de trabalho em diferentes concentrações Soluções Padrão Capilar de Sílica fundida 75um – 48,5cm 25kV Equipamento NaOH 1M por 5 min Eletrólito de corrida -20 min Condições 87 amostras humor vítreo Solventes orgânicos Preparo amostras Gráfico 3D: tempo de retenção, espectro de luz e intensidade de luz absorvida Detector por arranjo de diodos Objetivo Metodologia: Soluções padrão na [ ] de 1mg/mL de anfetamina, metanfetamina e 3 variações, cocaína e morfina Equipamento: eletroforese capilar Hewlett Packard modelo HPCE, controlado pelo software HP ChemStation – as separações foram feitas usando capilar de sílica fundida com 75um de diâmetro interno e 48,5cm de comprimento total, revestidos com polimida, termoestatizado a 25ºC, com tensao para separação de 25kV = 90uA Condições: antes do uso- passagem de solução aquosa de NaOH 1mol/L por 30 min; capilar era lavado com mesma solução por 5 min, e condicionado com o eletrólito de corrida por 20 min. Preparo das amostras: 87 amostras de humor vítreo (olhos) de cadáveres cedidos pelo IML de SP; amostras preparadas através de partição com solventes orgânicos – centrifugação – sobrenadante transferido para o CE Análises toxicológicas post mortem de humor vítreo oferece uma série de vantagens , como facilidade de obtenção, globo ocular estar anatomicamente isolado e protegido, menos sujeito a contaminação e putrefação do que o sangue, por exemplo. Material isento de enzimas e m.o. que pudessem degradar os analitos investigados. Detector por arranjo de diodos: é o sistema óptico escolhido, já que a análise exigia informações qualitativas mais refinadas do que as fornecidas apenas pelo tempo de retenção e migração. A resposta gerada por esse detector é um gráfico tridimensional onde se mostra, ao mesmo tempo, o tempo de retenção, o espectro de luz UV e visível e a intensidade de luz absorvida pelo analito em um dado comprimento de onda – TODOS OS ANALITOS ESTUDADOS POSSUÍAM GRUPAMENTOS CROMÓFOROS EM SUA ESTRUTURA QUÍMICA, CONDIÇÃO PARA SE USAR ESSE TIPO DE DETECTOR

63 Resultados e Conclusões
A Eletroforese Capilar com detecção de diodos pode ser utilizada para detecção e quantificação de drogas de abuso em humor vítreo, pois fornece limites de detecção, quantificação, precisão e exatidão adequados para essa finalidade. A Eletroforese Capilar com detecção de diodos pode ser utilizada para detecção e quantificação de drogas de abuso em humor vítreo, pois fornece limites de detecção, quantificação, precisão e exatidão adequados para essa finalidade.

64 Determinação e quantificação das vitaminas C e E associadas em produtos cosméticos

65 Vitaminas C e E são antioxidantes naturais encontrados em diversas frutas, verduras frescas, óleos vegetais – produtos comerciais contendo essas vitaminas na forma de ésteres tem sido desenvolvidos e comercializados, ressaltando-se que o aspecto “natural” dessas induz seu uso em cremes e loções. Atualmente a preocupação com a saúde e com a beleza tem levado os indivíduos a uma maior preocupação com a parencia, e isto tem impulsionado os pesquisadores e as industrias cosmeticas a desenvolverem produtos anti-envelhecimento. Validação de metodologias analíticas para identificar essas vitaminas em preparações cosméticas = para o controle de qualidade do produto e para a segurança do consumidor

66 OBJETIVO Análises Amostras
Validação das metodologias analíticas para a determinação e quantificação do derivado do ácido ascórbico, tetraisopalmitato de ascorbila e o princípio ativo acetato de tocoferila que estão associados nas formulações cosméticas. OBJETIVO Extratos em pó Placebo Amostras Espectrofotometria no UV Cromatografia Eletroforese capilar Análises Sílica – 50cm/50um NaOH 0,1M por 15 min Água deionizada e eletrólito de corrida Metodologia: amostras extraídas e preparação do placebo em farmácia de manipulação As substâncias de referência foram analisadas por espectrofotometria no UV, pelo método cromatográfico e pela eletroforese capilar Nas análises de eletroforese capilar usou-se capilar de silica fundida de 50cm de comprimento e 50umde diâmetro interno O capilar foi condicionado antes de cada análise com fluxo constante de NaoH 0,1M por 15 min, e pelo mesmo período com água deionizada e eletrólito de corrida, posteriormente aplicou-se alta tensão Um equipamento de eletroforese capilar PACE/MDQ com sistema de detecção por arranjo de diodos

67 Resultados e Conclusões
Resultados: Eletroferrograma para a separação dos padrões de vitaminas E e C – foram resultados positivos mas que não foram reprodutíveis posteriormente O desenvolvimento de metodologia analítica para a Eletroforese Capilar não obteve bons resultados através da técnica utilizando a microemulsão óleo-aquosa.

68 Desenvolvimento de metodologia para especiação de cromo em amostras por eletroforese capilar de zona

69 Sistema Eletroforético
Propor um desenvolvimento de um sistema de Eletroforese Capilar de zona para a determinação e especiação de metais em amostras de águas OBJETIVO Açude da Marcela Indústria de Curtume, Sergipe Amostras Caseiro: fonte de alta tensão, capilar, eletrodos de platina, detector de UV, software Sistema Eletroforético Sílica, revestido pr grupos silanóis Água destilada, HCl 1M – 5 min NaOH 0,1M – 15 min Solução eletrolítica Capilares Muito comum encontrar metais em amostras ambientais – é importante definir o nivel toxicológico de metais em diferentes estados de oxidação para o ambiente O capilar eletroforético é constituído de sílica fundida, e a parede revestida por grupos silanóis. Antes de iniciar as análises, o capilar de sílica era tratado sequencialmente com água destilada durante 2 min, ácido clorídrico 1mol/L (5min), água destilada novamente, hidróxido de sódio 0,1 mol/L (15 min) e, finalmente a coluna era condicionada com a solução eletrolítica por 30 min As amostras a serem analisadas foram coletadas em frascos de polietileno de 5 L no Açude da Marcela e no reservatório da Indústria de Curtume situados em Itabaiana- SE e analisadas imediatamente. Após uso, as amostras eram guardadas em geladeira a 4ºC. O sistema eletroforético montado no laboratório é do tipo caseiro. Este consiste numa fonte de alta tensão, um capilar mergulhado em dois reservatórios contendo o eletrólito, eletrodos de platina e um detector UV, uma bomba peristáltica para facilitar o condicionamento do capilar, além de um computador com software para aquisição de dados.

70 Resultados e Conclusões
Resultados: a) apenas água do açude b)água do açude +EDTA (controle) c) água do açude + 1mg/L de cromo VI + 1mg/L de cromo III + 1,3mg/L de EDTA d) água do açude + 10,0 mg de Cromo III + 13 mg/L de EDTA A eletroforese capilar de zona com detecção UV mostrou-se adequada para separação de complexos Cr(III)-EDTA com tempo de análise inferior a 5 minutos. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que Cr(III) foi totalmente complexado pela matéria orgânica dissolvida nas águas do curtume e do açude. Nenhum sinal referente aos picos do complexo foi observado nos eletroferogramas.

71 Referências http://www.fea.br/Arquivos/Biotecnologia/

72 Obrigado pela atenção!