AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) Universidade Federal de Pelotas Genômica II Profª Fabiana K. Seixas Discentes: Carolina Georg Magalhães Drielly Braite Fernanda E. Valiati Fernanda M. Rodrigues Mariana Brutschin
AFLP Técnica derivada da PCR utilizada para a definição de marcadores moleculares e detecção de polimorfismos; Revela variabilidade a nível de DNA; Técnica de DNA fingerprinting.
Princípio Amplificação seletiva por PCR de um subconjunto de fragmentos derivados da digestão total do DNA genômico pelo uso de uma combinação de enzimas de corte raro e de corte frequente que clivam a molécula em sítios específicos.
Metodologia A técnica é realizada em três etapas: 1. Digestão do DNA pelas enzimas de restrição e a ligação de adaptadores 2: Amplificação Pré-amplificação Amplificação seletiva 3: Análise do gel
Metodologia
Metodologia Combinação de enzimas: DNA amostral: Importante para garantir a digestão completa da molécula de DNA, uma vez que uma digestão parcial pode levar à caracterização de falsos polimorfismos. Enzimas de corte raro: EcoRI, AseI, HindIII, ApaI e PstI Enzimas de corte frequente: MseI e TaqI DNA amostral: Precisa ter alta pureza, o que é essencial para que ocorra a digestão total do DNA genômico, sendo necessário o uso de um excelente método de extração e quantificação do DNA.
Metodologia
Metodologia Pré-amplificação
Amplificação seletiva Metodologia s Amplificação seletiva
Metodologia - Análise final feita através de eletroforese em gel de policrilamida corado com nitrato de prata; - Polimorfismo detectado pela presença ou ausência de determinada banda
Aplicações Genética forense Teste de paternidade Diagnóstico de doenças hereditárias Construção de mapas genéticos
Vantagens Grande poder de detecção de variabilidade genética; Não é necessário o conhecimento prévio da informação de sequências-alvo ; Sensível; Rápido; Simples.
Obrigada