PCR Genética Molecular
Polymerase chain reaction Técnica extremamente eficaz para amplificação de genes; Kary Mullis – prémio Nobel da química 1993 Amplificação feita in vitro ; Identificação do perfil genético; A sequência pode ser amplificada milhões de vezes em poucas horas;
Utilidades da técnica PCR Diagnóstico de doenças hereditárias; Diagnóstico de doenças infeciosas; Fingerprints Testes de paternidade CSI Criação de organismos transgénicos; Organismos transgenicos: organismos cujo material genetico foi alterado, sendo inserido um novo gene ou modificando genes existentes;
Procedimento Extração do DNA da célula; Adição do DNA ao master mix + primers contém: dNTPs solução tampão Taq polimerase MgCl2 Extração – material genetico dentro do nucleo, isolaçao DNA, rebentar com a membrana celular dNTPS – 4 nucleotidos de DNA, adenina, citosina, guanina e tinina. Extensao das novas cadeias de DNA S.Tampao- gera condiçoes para a Taq polimerase MgCl2- Taq requer presença de Mg para funcionar como co-fator, catalizador Mg não é totalmente consumido mas é essencial.
92º desnaturação da dupla cadeia de DNA 52º ligação dos primers ao DNA No termociclador 92º desnaturação da dupla cadeia de DNA 52º ligação dos primers ao DNA 72º Amplificação/replicação pela Taq polimerase Este ciclo é repetido cerca de 35 vezes; Intrepretação dos resultados através de uma eletroforese; 92 – quebra das pontes de hidrogenio, 52 – primers ligam se ao molde, 72 – ativação da Taq e replicação