Faura Mariza Cangy Amade (MSc.) Prof. Paxie Chirwa Fundo Nacional de Investigação - MCT Faculdade de Agronomia e Engenharia Florestal- UEM, Universidade de Pretória 5 º Seminário Nacional de Divulgação dos Projectos Financiados 20 a 21 de Novembro de 2014 Centro Internacional de Conferências Joaquim Chissano Maputo, Moçambique Diversidade genética de duas espécies de mangal, Avicennia marina e Ceriops tagal em Moçambique: estudo baseado em SSRs – instrumento para o apoio à gestão sustentável dos mangais em Moçambique Faura Mariza Cangy Amade (MSc.) Prof. Paxie Chirwa

SECÇÃO 1: Objectivos do Projecto O papel da instituição que aloja o projecto; Gestão financeira e admnistrativa do projecto; Auxílio na aquisição de materiais; Fornecimento de bens e equipamentos;

SECÇÃO 1: Object. Cont. Os objectivos do projecto Quantificar a variação genética dentro das populações da Ilha, e entre estas e as populações da zona continental; Avaliar a estrutura genética/diferenciação das populações e o fluxo de genes; Descrever a relação filogenética entre as populações. Produzir um relatório que sirva de instrumento para o apoio à gestão e conservação dos mangais em Moçambique;

SECÇÃO 1: Object. Cont. O local de implementação do projecto: Província de Maputo, Zambezia e Cabo Delgado. Beneficiários Por identificar um estudante, para a realização do seu trabalho de tese. Cabo delgado Zambézia Maputo

SECÇÃO 1: Object. Cont. Desafios e constrangimentos encontrados O projecto é parte da tese do PhD que está a decorrer na Universidade de Pretória, portanto, as vezes a supervisão não acompanha o tempo proposto para a execusão das actividades do projecto; Testados 15 marcadores microssatelite, encontrados na literatura, e apenas dois pares de marcadores da espécie Avicennia marina foram aprovados para o estudo da sua estrutura genética; A quantidade de DNA obtida atravéz do método CTAB e os kits de extração Zymo research e Nucleospin plant II, para a espécie Ceriops tagal, foi baixa ( > 60 ng/ml).

A proposta de solução dos mesmos SECÇÃO 1: Object. Cont. A proposta de solução dos mesmos Continuar a tentar outros método de extraccao para plantas com altos níveis de polissacarídeos e fenóis e testar outros Kits de extração de DNA para a espécie Ceriops tagal; Criar novos marcadores microssatelite, para as espécies Avicennia marina e Ceriops tagal.

SECÇÃO 2: Os resultados do projecto Os resultados principais alcançados; Local de amostragem: Costa do Sol – Província de Maputo. Laboratório do Inqaba Biotech - Pretória. DNA isolado (61.3 ng/µl) em 1 amostra da folha, kit Zymo Research Plant/Seed DNA Isoladas as sequências com SSR de Avicennia marina, método FIASCO (Fast solation by AFLP of Sequences Containing Repeats)(Zane et al., 2002 ).

SECÇÃO 2: Os resul. Cont. Método FIASCO consiste numa reacção eficiente de digestão e ligação, seguindo o procedimento do AFLP. 1. Digestão DNA: 10μL de DNA genômico, 1 μL of MseI, 2 μL 10x Buffer R, volume total de 20 μL. Incubação a 65ºC por 2 h.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont. 2. Ligação: 2 μL adaptor, 2 μL digested DNA, 1 μL T4 buffer, 2 μL of H2O, 1 μL PEG 4000. Incubado 22º C 1 h. Amplificado PCR: 1 μL DNA digerido-ligado, 2 μL AFLP Adaptor – specific MseI-N primer, 12.5 μL Dream Taq, V.total 25 μL, a 95ºC 2 min, 95ºC 30 sec, 53ºC 1 mim, 72ºC 2 mim and 72ºC at 7 mim, 25 ciclos.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont. 3. Hibridização do DNA com sondas 3 grupos de combinações de di, tri e tetranucleotidos: Grupo 1 (GATA)6, (GTG)9 e (AGGG)6, G2 (ATA)7, (AAAT)6 e (AC)10, e G3 (TGC)8 e (CT)10. Portanto, 23 µL de DNA amplificado foi misturado com 1μL de oligonucleotidos biotinados, e of SSC 4.2 X SDS 0.07% para o volume t. de 100 µL. As moleculas de DNA hibridizadas foram selectiv. capturadas por esferas magnéticas de streptavidina. As esferas previamente preparadas foram adicionadas ao DNA + moléculas hibridizadas c sondas e incubadas 30min c constante agitação.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont. O complexo esferas-sondas-DNA foi separado do tampão de hibridização por um campo magnético, e descartado. A duas últimas etapas foram 3 lavagens não específicas e 3 lavagens específicas.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont. Sustentabilidade do projecto Os fundos e o tempo previsto para a implementacao do projecto não serão suficientes, devido a etapa da criação dos marcadores microssatélite para as duas espécies.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont. A utilidade destes para a área de pesquisa A biblioteca dos microssatelites será util para estudos sobre as população das espécies de Avicennia marina e Ceriops tagal, e para outras espécies que tiverem compatibilidade com as mesmas. Saber sobre a estrutura genética, o fluxo de genes; Recomendar em casos de reflorestamento.

OBRIGADA