Avaliação dos efeitos genotóxicos da exposição ocupacional a pesticidas sobre agentes sanitários da Fundação Nacional de Saúde do Estado de Minas Gerais Fernanda de Souza Gomes Kehdy Orientadora: Profª Maria Cristina Lima de Castro Co-orientadora: Profª Cleusa Graça da Fonseca

Introdução Pesticidas Seletividade dos pesticidas Risco tóxico para humanos

Introdução Tipos de intoxicações: Aguda Sub-crônica Crônica

Biomonitoramento genotoxicológico Introdução Potencial genotóxico CARCINOGÊNESE Biomonitoramento genotoxicológico

Introdução Biomarcadores: - análise de aberrações cromossômicas; - análise de troca entre cromátides irmãs; - frequência de micronúcleos;

Introdução Micronúcleos: Efeito aneugênico

Introdução Micronúcleos: Efeito clastogênico

Introdução agentes clastogênicos agentes aneugênicos Micronúcleos agentes aneugênicos - Teste de genotoxicidade in vitro; - Biomarcador p/ efeito de exposição a genotóxicos; (Norppa et al.,2003)

Introdução Vantagens do teste do micronúcleo: - Mais simples; - Treinamentos mais curtos; - Mais rápido; - Requer menos custo; - Maior poder estatístico;

Introdução Fator de risco p/ câncer p53; Inibição do ciclo celular p53 Danos ao DNA p53 Reparo do DNA Ativação oncogenes Apoptose

Introdução p53: - Gene TP53; - Cromossomo17p13.1; - 393 aminoácidos; Pro72 p53 Polimorfismo Apoptose Arg72

Introdução Estado de Minas Gerais: ~ 3000 agentes sanitários vinculados à FUNASA – aplicam pesticidas para o controle de vetores de doenças (180 reg. metropolitana) Sexo masculino Idade: 30 a 50 anos Pesticidas: piretróides e organofosforados Não foi feita análise dos efeitos genotóxicos dos pesticidas sobre estes trabalhadores;

Piretróides, organofosforados Introdução N ° indiv. (exp/cont) Exposição Duração (anos) Biomarcador Resultado Referência 50/47 Piretróides, DDT 1-25 CA Pos (Ruppa et al.,1989) 26/26 Piretróides, organofosforados 2-18 (Ruppa et al.,1991) 48/50 4-50 SCE Neg (Pasquini et al.,1996) 22/16 7 MN (Venegas et al.,1998) 71/75 2-55 (Bolognesi et al.,1998)

Introdução Falta de concordância entre os resultados: - diferentes condições de exposição (magnitude, uso de equipamentos de proteção); - nº de pesticidas utilizados; - combinação de pesticidas; - tempo e frequência de exposição; - características do indivíduo (idade, sexo, hábito de fumar e ingerir bebidas alcoólicas, estado nutricional); (Bolognesi, 2003)

Objetivo geral Avaliar os efeitos genotóxicos da exposição ocupacional a pesticidas em agentes sanitários vinculados à FUNASA, através do biomonitoramento genotoxicológico destes indivíduos, utilizando como biomarcador a frequência de micronúcleos em cultura de linfócitos isolados e estabelecer o genótipo do gene TP53 em relação ao polimorfismo do códon 72 para fins prognósticos.

Objetivos específicos Delineamento das amostras; Padronização das condições de cultura de linfócitos isolados; Produção de lâminas; Determinação da frequência de MN; Verificação, através de testes estatísticos, de relação entre a frequência de MN e exposição a pesticidas; Amplificação, través de PCR, de fragmento do TP53 para detecção do genótipo em relação ao códon 72;

Metodologia Grupos amostrais: Grupo experimental: 30 agentes sanitários vinculados a FUNASA, do sexo masculino, idade entre 30 e 50 anos, ocupacionalmente expostos a pesticidas; Grupo controle: 30 indivíduos do sexo masculino, idade entre 30 e 50 anos, sem história de exposição a pesticidas; 2) Entrevista. (idade, hábitos e exposição)

3) Teste do MN Metodologia

Substâncias a serem acrescentadas na cultura Metodologia Tempo de cultura (h) Substâncias a serem acrescentadas na cultura PHA 24 48 Ct-B 72 96 Colher células (Adaptado de Fenech,2000)

Metodologia Célula binucleada

Metodologia Características do Micronúcleo: Morfologia idêntica a dos núcleos principais; Diâmetro entre 1/16 e 1/3 dos núcleos principais; Mesma coloração dos núcleos; Não apresentar refringências; Não estar conectado a um dos núcleos; Não estar sobreposto a nenhum dos núcleos; (Fenech, 2000)

Metodologia Parâmetros a serem considerados: - Frequência de MN/1000 cél. binucleadas; - Frequência de células binucleadas micronucleadas/1000 cél. binucleadas; - Distribuição de cél. binucleadas com 0, 1, 2, 3 ou mais MN; (Fenech, 2000)

Célula binucleada apresentando 1 MN Metodologia Célula binucleada apresentando 1 MN

Célula binucleada apresentando 2 MN Metodologia Célula binucleada apresentando 2 MN

Metodologia Células binucleadas apresentando 3 MN

Células binucleadas apresentando mais de 3 MN Metodologia Células binucleadas apresentando mais de 3 MN

Metodologia 4) Análises estatísticas: frequência de MNs idade hábito de fumar ingestão de bebidas alcoólicas exposição a pesticidas (tempo e frequência) Teste do qui-quadrado

Metodologia 5) Amplificação do TP53:

Metodologia Primers Sequência Tamanho do produto p53+/p53Arg- p53+: 5’TCCCCCTTGCCGTCCCAA p53Arg-: 5’ CTGGTGCAGGGGCCACGC Alelo Arg 141 pb p53Pro+/p53- p53Pro+: 5’GCCAGAGGCTGCTCCCCC p53-: 5’CGTGCAAGTCACAGACTT Alelo Pro 177pb

Metodologia 6) Aspectos éticos: Consentimento livre e esclarecido; Princípios éticos, aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFMG.

Obrigada!!!