Disciplina: Preparação Citológica e Análise Citogenética Docente: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira Discente: Julia Musolino Montineri

Introdução Talassemias Alterações genéticas monogênicas mais comuns no mundo. Alteração na síntese de uma ou mais cadeias polipeptídicas da hemoglobina (Hb) Desequilíbrio entre essas subunidades Dificulta o processo de eritropoese

Talassemia alfa 10% da população do sudoeste do estado de São Paulo Introdução Talassemia alfa 10% da população do sudoeste do estado de São Paulo 20% em outras regiões Diferenças composição étnica  grande miscigenação ocorrida ao longo da história

Alfa Talassemia Resultante de mutações nos genes alfa Introdução Alfa Talassemia Resultante de mutações nos genes alfa Braço curto do cromossomo 16 na região 16p.13.3 4 genes α (αα/αα) α1 e α2 iguais divergem apenas 17% α2 expressa de duas a três vezes mais que α1 > Consequência no quadro clínico Síntese deficiente de cadeias globínicas alfa Modifica a composição da molécula de hemoglobina

Altera a fisiologia e morfologia do eritrócito Introdução Altera a fisiologia e morfologia do eritrócito Excesso de cadeias despareadas pode se ligar para formar tetrâmeros de caráter instável Hb H (adulto) Hb Bart's (fetal)

Acumula na membrana eritrocitária  diminui vida útil da célula Introdução Hb H 10x mais afinidade com oxigênio que a Hb A Prejudicam a interação heme-heme Liberam quantidades insuficientes de oxigênio para os tecidos Alterações fisiológicas e morfológicas dos eritrócitos Microcitose e hipocromia em diferentes graus Quando oxidada  precipitados intra-eritrocitários  quando presentes no eritroblastos  destruição intramedular dos precursores eritróides  eritropoese ineficiente. Acumula na membrana eritrocitária  diminui vida útil da célula

Introdução Sintomas Apresentam anemia com graus variáveis Hipocromia Microcitose Poiquilocitose Diminuição da fragilidade osmótica Presença de Hb H em eletroforese Corpos de inclusão com coloração vital (azul cresil brilhante)

O objetivo Avaliar o perfil hematológico, por meio dos valores de hemograma (RBC, HGB, HCT, VCM, HCM e CHCM) de indivíduos identificados como portadores de talassemia alfa por métodos de rotina diagnóstica, das regiões Sudeste e Nordeste do Brasil.

Material e Métodos Casuística 1.010 amostras de sangue periférico Idades variando de 1 a 90 anos Sem distinção de sexo Sem distinção de etnia Região Sudeste e Nordeste do Brasil

Métodos Análise dos índices eritrocitários Material e métodos Métodos Análise dos índices eritrocitários Resistência globular osmótica em solução de cloreto de sódio a 0,36% Análise da morfologia eritrocitária Eletroforese em acetato de celulose em pH alcalino Eletroforese em acetato de celulose em pH neutro Pesquisa de corpos de inclusão de Hb H com coloração de azul cresil brilhante Contagem de reticulócitos Dosagem de Hb A2 por HPLC

PESQUISA DE CORPÚSCULOS DE HEINZ E AGREGADOS DE HEMOGLOBINA H Material e métodos PESQUISA DE CORPÚSCULOS DE HEINZ E AGREGADOS DE HEMOGLOBINA H Princípio: Os corpúsculos de inclusão de hemoglobina H são formados por cadeias beta oriundas da desnaturação do tetrâmero. Após coloração esses corpúsculos apresentam-se dispostos homogeneamente no interior dos eritrócitos como pequenos pontos azulados. Reagentes: Solução salina: Cloreto de sódio 0,9 g Água destilada q.s.p. 100 mL Solução de Azul Cresil Brilhante: Azul Cresil brilhante 1,0 g Solução salina 100 mL Solução citrato 25 mL Solução citrato: Citrato de sódio 2,2 g Água destilada q.s.p. 100 mL Corpos de Hb H

Material e métodos Procedimento: - Colocar 50 ml de sangue total em tubo de ensaio pequeno e adicionar 50 ml de solução de azul Cresil brilhante. Agitar o tubo suavemente. Incubar o material a 37ºC por 30 e 60 minutos - Fazer esfregaços finos e examinar ao microscópio em objetiva de imersão. Interpretação: A presença de Hb H nos eritrócitos aparece como fina granulação distribuída homogeneamente, caracterizando um portador de alfa talassemia.

Resultados e discussão 82,28% provenientes da região Sudeste 71,60% do sexo feminino Todos possíveis portadores de talassemia alfa RBC  contagem de glóbulos vermelhos HGB  dosagem de hemoglobina HCT  o hematócrito VCM  volume corpuscular médio HCM  hemoglobina corpuscular média CHCM  concentração de hemoglobina corpuscular média

Material e métodos Valores de Referência: RBC (103/mm3) 5,4 a 8,0 HGB (g/dl)  14 ± 2 g/dl HCT (%)  47 ± 5% VCM (μ3)  87 ± 53 HCM (pg)  29 ± 2 pg CHCM (%)  34 ± 2%

Considerações dos índices Resultados e discussão Considerações dos índices Variações de idade (níveis de Hb) Sexo Etnias Interferentes ambientais (altitude, tabagismo) Os valores de VCM baixo é sugestivos de defeito na síntese de hemoglobina Os valores de HGB foram relativamente baixas (mostrando uma provável deficiência na síntese de hemoglobina)

Resultados e discussão Os valores de HCT estavam baixos, podendo levar a má oxigenação tecidual Os valores baixos de VCM  presença de microcitose Os valores de HCM baixos  hipocromia dos eritrócitos Alterações no CHCM não foram significativas As mulheres foram as mais afetadas em todos os parâmetros em ambas as regiões Os dois índices mais afetados foram os níveis de HGB e o HCT

Resultados e discussão O perfil das duas regiões são discretamente diferentes devido à composição étnica destas regiões fatores nutricionais Os índices eritrocitários complementam os testes de triagem de hemoglobinopatias Os resultados contribuíram para caracterizar o perfil dos portadores de talassemia alfa na população brasileira, visando uma melhora na qualidade de vida desses pacientes Aconselhável a análise molecular das principais alterações genéticas do gene alfa globina

Obrigada!